蓖麻花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)愈傷組織技術(shù)的研究.pdf

1、本文以通蓖5號為試材，采用花藥培養(yǎng)的方法，對蓖麻花藥培養(yǎng)中誘導(dǎo)愈傷組織的影響因素進(jìn)行了研究。結(jié)果表明： 接種前對蓖麻花蕾進(jìn)行滅菌處理，流水緩慢沖洗30min，在無菌條件下，先用75％乙醇處理30s，然后用0.1％升汞處理3min效果最好，獲得無菌材料多。在含20ml固體培養(yǎng)基的50ml三角瓶中，接種密度以3/5個花蕾的花藥量為最佳。在常用于花藥培養(yǎng)的的MS、NB、N6、Bs四種培養(yǎng)基中，雖然均可誘導(dǎo)花藥產(chǎn)生愈傷組織，但以MS培養(yǎng)

2、基誘導(dǎo)效果最好。 花藥培養(yǎng)前對蓖麻花蕾進(jìn)行低溫預(yù)處理可明顯提高蓖麻花藥培養(yǎng)愈傷組織的形成，但時間過長或過短，都不利于愈傷組織的增殖。其中4℃條件下對花蕾處理Sd，蓖麻花藥培養(yǎng)愈傷組織增殖率最高。接種后對花藥進(jìn)行低溫預(yù)培養(yǎng)3d同樣可以提高蓖麻花藥愈傷組織增殖率。適宜的高溫與處理天數(shù)，能促進(jìn)愈傷組織的產(chǎn)生。給予蓖麻花藥33℃的高溫處理48h最有利于蓖麻愈傷組織的增殖。 在花藥誘導(dǎo)愈傷組織階段，蔗糖和麥芽糖在蓖麻花藥培養(yǎng)中僅起

3、調(diào)節(jié)滲透壓和提供碳源的作用，在誘導(dǎo)蓖麻花藥產(chǎn)生愈傷組織效率方面無差異，蔗糖濃度為30g/L時，愈傷組織增殖率最高。在蓖麻花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)愈傷過程中，最佳PGR為：6-BA1.5mg/L，NAA0.9mg/L。在基本培養(yǎng)基中瓊脂含量為7g/L時，愈傷組織增殖率最高。誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加適宜濃度的脯氨酸(750mg/L)和水解酪蛋白(750mg/L)可以提高蓖麻花藥愈傷組織的增殖率。100mg/L的抗壞血酸可以緩解花藥離體培養(yǎng)中花藥的褐化現(xiàn)象?；钚?/p>