用水稻的花藥愈傷組織作為受體的轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)選用水稻花藥愈傷組織作為轉(zhuǎn)化的受體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將已克隆的具有水稻白葉枯病廣譜抗性的基因，Xa21，導(dǎo)入臺(tái)北309、日本晴、中花11、中花9四個(gè)品種中。花藥愈傷組織對(duì)其四種品種誘導(dǎo)分析，本實(shí)驗(yàn)共獲得31株綠苗，其中臺(tái)北309有14株，日本晴為13株，中花11為1株，中花9為3株。對(duì)25株植株經(jīng)過(guò)形態(tài)觀察，染色體計(jì)數(shù)，F(xiàn)ISH三種方法綜合鑒定。對(duì)T0代中28株再生植株進(jìn)行了PCR檢測(cè)。有24株驗(yàn)證為陰性。對(duì)PCR檢測(cè)呈陽(yáng)性的

2、15株再生植株做Southern檢測(cè)。分別用限制性?xún)?nèi)切酶EcoRⅤ和Hind III進(jìn)行酶切。經(jīng)檢測(cè)證明外源DNA已經(jīng)整合到這15株再生植株的基因組中。挑選出2個(gè)經(jīng)PCR和Southern驗(yàn)證為陽(yáng)性的臺(tái)北309的單倍體再生植株，用其根尖細(xì)胞染色體作熒光原位雜交。雜交信號(hào)分別出現(xiàn)在一個(gè)單倍體的1號(hào)染色體上和另一個(gè)單倍體的2號(hào)染色體上，顯示出外源基因片段的插入位點(diǎn)。對(duì)23株T0代再生植株接水稻白葉枯菌P6小種后進(jìn)行田間抗性檢測(cè)。其中有19