香石竹愈傷組織的誘導(dǎo)及遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、香石竹是多年生的草本花卉，作為世界四大切花品種之一，具有很高的觀賞價值。由于一般的香石竹瓶插壽命相對較短，影響了其觀賞價值。而傳統(tǒng)的保鮮方法多會造成環(huán)境污染，且成本較高。而將利用基因工程技術(shù)，能從根本上改變它的瓶插壽命。本研究從兩方面進(jìn)行：一方面初步探討了以香石竹的花蕾為外植體的愈傷組織的誘導(dǎo)及植株再生體系的建立，從而為以此為受體的香石竹遺傳轉(zhuǎn)化奠定了基礎(chǔ)；另一方面將兩個不同T-DNA結(jié)構(gòu)的ACO基因轉(zhuǎn)入到射散香石竹內(nèi)，從而獲得PCR陽

2、性植株。研究結(jié)果如下：
　　 (1)愈傷組織的誘導(dǎo)及分化本研究采用多頭紅色品種和多頭粉色品種為實驗材料，以香石竹的花蕾為外植體，就影響愈傷組織誘導(dǎo)的有關(guān)因子，包括不同香石竹品種、激素的濃度及種類、蔗糖的濃度、外植體的大小等方面進(jìn)行了探討，從而誘導(dǎo)出了香石竹的愈傷組織，并進(jìn)一步分化成植株。結(jié)果表明：不同植物生長調(diào)節(jié)劑的濃度及其組合對香石竹愈傷組織的誘導(dǎo)率不同，在MS+2.0mg/L2,4-D+0.2mg/L6-BA+9％蔗糖+7.

3、5g/L瓊脂的培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)率最高，達(dá)到85.1％。外植體的大小對愈傷組織的誘導(dǎo)也有很大的影響，花蕾大小長度為1.0～1.5cm時的誘導(dǎo)率最高。蔗糖濃度在一定程度上影響著愈傷組織的分化能力，蔗糖的最佳濃度為3％。
　　 (2)遺傳轉(zhuǎn)化建立高效的再生體系是提高香石竹遺傳轉(zhuǎn)化率的基礎(chǔ)。以香石竹的葉片為外植體，建立起了‘安靜’、‘想向’、‘華爾茲’、‘火星’和‘苔絲’5個香石竹品種的再生體系。不同品種間再生率存在顯著差異，其中‘苔絲’

4、葉片的再生率最高可以達(dá)到59％以上，是葉片再生率最高的品種，而‘火星’的葉片再生率最高只有36％。以香石竹‘安靜’、‘想向’、‘華爾茲’、‘火星’和‘苔絲’5個品種的葉片作為外植體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將反義重復(fù)ACO和正義重復(fù)ACO基因轉(zhuǎn)入到上述5個品種內(nèi)。實驗中以在分化培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)2d，菌液中浸泡8-12min,AS濃度為100μmol/L，共培養(yǎng)時間為3天，篩選培養(yǎng)基為MS+BA1.0mg/L+NAA0，3mg/L+Hyg4mg/L