26752.刀豆愈傷組織建立及愈傷組織中刀豆氨酸的形成

1、^厶、；獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：“：堡圣塹簽字日期：勱屆年∥月肋El學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有

2、關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文件，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))。)＼學(xué)位論文作者簽名：磕盤蘢指導(dǎo)教師簽名≤之墮簽字日期：矽聲年莎月加日簽字日期訓(xùn)年p月I刁日學(xué)位論文作者畢

3、業(yè)后去向：工作單位：通信地址：電話：郵編：摘要㈣刪㈣㈣ⅢY17350芝百。刀豆氨酸是一種天然非蛋白氨基酸，和精氨酸的分子結(jié)構(gòu)非常相似，由于其能代替精氨酸被精氨酸t(yī)RNA合成酶誤認(rèn)為是精氨酸而合成到蛋白質(zhì)中，而使含刀豆氨酸的蛋白質(zhì)生理功能有缺陷，從而有良好的抗腫瘤性。刀豆氨酸是蝶形花亞科(Papilionnoidea)和豆科(1eguminosae)植物種子中的可溶性氮的存貯庫(kù)，它也被認(rèn)為是一種保護(hù)植物不被病蟲(chóng)害等侵染的植物天然性次生代謝

4、產(chǎn)物，這是因?yàn)榈抖拱彼釋?duì)某些害蟲(chóng)表現(xiàn)出一定的毒性作用，由于其具有毒性而被認(rèn)為是一種潛在的殺蟲(chóng)劑，其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)為低毒性，對(duì)自然界無(wú)污染，從它的作用機(jī)制判斷，由于它不損害病蟲(chóng)的寄生性天敵，因此具有保護(hù)病蟲(chóng)天敵昆蟲(chóng)特性。刀豆氨酸的主要來(lái)源是通過(guò)人工合成和從植物中提取兩種途徑。而植物提取中通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)可以獲得次生代謝產(chǎn)物且一般是成本低，收取率高，對(duì)環(huán)境污染少，目前國(guó)內(nèi)還未見(jiàn)關(guān)于刀豆愈傷組織的報(bào)道，本研究主要是利用刀豆種子誘導(dǎo)愈傷組織，以細(xì)胞鮮

5、重、干重、細(xì)胞相對(duì)生長(zhǎng)率以及刀豆氨酸含量為考察指標(biāo)，進(jìn)行多因素多水平的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，分析液體懸浮培養(yǎng)過(guò)程中生理生化指標(biāo)，且對(duì)其中的刀豆氨酸含量進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)研究擬建立一種新的簡(jiǎn)便、快速測(cè)定刀豆氨酸的方法，研究結(jié)果表明：(1)通過(guò)研究2，4二硝基氟苯與刀豆氨酸在pH95硼砂緩沖溶液中反應(yīng)的最佳條件，建立了一種新的、快速簡(jiǎn)便的測(cè)定刀豆氨酸的方法，即運(yùn)用了分光光度法測(cè)定絡(luò)合物在571hill處的吸光度。結(jié)果表明：在50℃水浴30min后，刀豆氨酸

6、與2，4二硝基氟苯發(fā)生顯色反應(yīng)，即形成綠色l：1的穩(wěn)定絡(luò)合物。其最大吸收峰在571nm，表觀摩爾吸光系數(shù)￡=1086104L／(molem)，在1375～22000Itg／mL范圍內(nèi)遵守比爾定律，對(duì)應(yīng)線性回歸方程為：y=00051x00682；相關(guān)系數(shù)為：R2=09939。加標(biāo)回收率為9660～10156％范圍之內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1768％之內(nèi)，從而建立了刀豆氨酸簡(jiǎn)單、快速測(cè)定的新方法。(2)以刀豆種子為材料，誘導(dǎo)刀豆愈傷組織，建立刀豆

7、愈傷組織體系，并進(jìn)一步培養(yǎng)和增殖，同時(shí)，測(cè)定了不同顏色愈傷組織中刀豆氨酸含量和不同生長(zhǎng)時(shí)期愈傷組織中刀豆氨酸含量。結(jié)果表明：在MS培養(yǎng)基中可以誘導(dǎo)出淺綠色的刀豆愈傷組織，且在增殖培養(yǎng)基中刀豆愈傷組織的生長(zhǎng)特點(diǎn)呈現(xiàn)“S”型曲線模式，生長(zhǎng)周期為24d。研究發(fā)現(xiàn)在綠色愈傷組織中刀豆氨酸含量最高為43462Ixg／gFW(細(xì)胞鮮重)，其次是淺綠色的，接著是白色的，含量最少的是褐化的愈傷組織216261tg／gFW。在愈傷組織組織生長(zhǎng)過(guò)程中刀豆氨