粗毛淫羊藿愈傷組織的誘導及細胞懸浮培養(yǎng)體系的建立.pdf

1、本文以粗毛淫羊藿幼葉為外植體材料，利用植物組織培養(yǎng)技術，對其進行愈傷組織誘導，繼代培養(yǎng)，懸浮培養(yǎng)的研究，篩選出適宜的培養(yǎng)條件，以建立高效的懸浮培養(yǎng)體系為目的，為粗毛淫羊藿野生資源保護而建立高效大規(guī)模的淫羊藿黃酮離體生產(chǎn)提供技術基礎。所得主要結(jié)果如下：
　　1.愈傷組織誘導階段，通過研究不同滅菌劑、消毒處理條件、不同培養(yǎng)基、不同激素配比、不同光照條件對粗毛淫羊藿愈傷組織誘導的影響，并用紫外分光光度法測定愈傷組織中總黃酮的含量。結(jié)果表

2、明：利用粗毛淫羊藿幼葉進行愈傷組織培養(yǎng)，用2％的NaClO消毒14min,接種于培養(yǎng)基MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L+NAA1mg/L,在24℃1000lx光照強度條件下進行誘導效果最好，繼代和保存在黑暗條件下進行最為適宜。誘導出的胚性愈傷組織總黃酮含量較高（5.38%），與野生粗毛淫羊藿總黃酮含量想當，也高于藥典規(guī)定的標準（5.0%）。
　　2.愈傷組織的繼代培養(yǎng)階段，研究了不同培養(yǎng)

3、基、不同激素種類和濃度對愈傷組織的影響。結(jié)果表明：粗毛淫羊藿幼葉愈傷組織最佳繼代培養(yǎng)為MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L+NAA1mg/L,且粗毛淫羊藿愈傷組織生長曲線呈S型，最佳繼代周期應在27d內(nèi)進行。
　　3.懸浮培養(yǎng)體系建立階段，分別以細胞生長率、總黃酮含量、淫羊藿苷含量為指標，研究了初始接種量、搖床轉(zhuǎn)速、蔗糖濃度、基本培養(yǎng)基、激素配比和培養(yǎng)基初始pH值等因素對細胞懸浮培養(yǎng)體系的影

4、響，同時對懸浮培養(yǎng)過程中細胞的生長曲線的測定和總黃酮含量的積累進行了研究。實驗結(jié)果表明：最適懸浮培養(yǎng)條件是以MS為培養(yǎng)基，不含瓊脂，配制成液體培養(yǎng)基，在每瓶含有25mL培養(yǎng)液的100mL三角瓶中接入2.0g愈傷組織，蔗糖濃度為30g/L，搖床轉(zhuǎn)速為120rpm，25℃，激素濃度配比為2,4-D（2mg/L)、6-BA（0.5mg/L）、NAA
　?。?.5mg/L)，初始pH為5.8。在上述環(huán)境下對粗毛淫羊藿懸浮細胞進行培養(yǎng)，測得