藥用石斛組織培養(yǎng)體系的建立及細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)的研究.pdf

1、本論文系統(tǒng)地論述了金釵石斛的組織培養(yǎng)和細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)，建立了金釵石斛組織培養(yǎng)體系并優(yōu)化了金釵石斛原球莖懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)條件，為金釵石斛試管苗的人工種植及利用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)來獲取其有效成份的研究提供了參考依據(jù)，試驗(yàn)結(jié)果如下： 1、石斛原球莖固體培養(yǎng)時(shí)鮮重凈增殖倍數(shù)較高，較佳原球莖增殖培養(yǎng)條件為：B5培養(yǎng)基+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L，椰子汁添加濃度為每升15％，最適培養(yǎng)周期為30d。 2、五種不同培養(yǎng)方

2、式比較試驗(yàn)表明：液體24h/d振蕩培養(yǎng)和固體培養(yǎng)方式對原球莖增殖最好，其次是液體12h/d振蕩培養(yǎng)和半固體培養(yǎng)，液體靜止培養(yǎng)方式最差。 3、石斛原球莖懸浮培養(yǎng)對原球莖鮮重增殖效果較好，較佳培養(yǎng)條件為：B5培養(yǎng)基+6-BA2.0mg/L+NAA0.3mg/L，接種量和培養(yǎng)液比例為3.0g：30ml，24h/d光照培養(yǎng)，在轉(zhuǎn)速為100r/min振蕩式搖床上24h/d振蕩培養(yǎng)，最適培養(yǎng)周期為30d。 4、固體培養(yǎng)和液體懸

3、浮培養(yǎng)的石斛原球莖細(xì)胞生長曲線大致呈“S” 型。細(xì)胞生長曲線顯示延遲期為0-10d，對數(shù)增長期為10-30d，穩(wěn)定期為30-40d，衰亡期為40-50d。 5、石斛原球莖較易分化，較佳分化激素配比為：KT2.0mg/L+NAA0.3mg/L，分化率達(dá)69.76％。 6、不同濃度的6-BA與高濃度的NAA組配對石斛苗的增殖作用優(yōu)于與低濃度的NAA組配的處理，石斛苗增殖培養(yǎng)較佳條件為：B5培養(yǎng)基+6-BA3.0mg/L+NA

4、A2.0mg/L，苗增殖倍數(shù)為6.01倍。 7、濃度范圍為1.0-3.0mg/L的NAA和IBA均能促進(jìn)石斛苗生根，1/2MS培養(yǎng)基比Ms培養(yǎng)基更適于為石斛苗的生根培養(yǎng)基，石斛苗較佳的生根壯苗培養(yǎng)條件為：1/2MS4+6-BA0.2mg/L+NAA2.0mg/L，生根率高達(dá)100％。 8、金釵石斛的移栽基質(zhì)要求通氣性和保濕性較好，從17種不同的移栽基質(zhì)中優(yōu)選出兩種適合金釵石斛試管苗生長的移栽基質(zhì)為：苔蘚+椰殼粉+樹皮(1