杜仲組織培養(yǎng)及愈傷組織植株再生體系的建立.pdf

1、T i s s u e C u l t u r e o f E u c o m m i a u l m o i d e s O l i v ．a(chǎn) n d t h eE s t a b l i s h m e n t o fP l a n t R e g e n e r m i o n S y s t e m t h r o u g h C a l l u sb yW A N G Z h e n gA t h e s i ss u b m

2、 i t t e d i n p a r t i a ls a t i s f a c t i o n o f t h eR e q u i r e m e n t s f o rt h ed e g r e eo fM a s t e r o f A g r i c u l t u r e1 nL a n d s c a p e p l a n t s a n d H o r t i c u l t u r e1 nC e n 仃a

3、lS o u t h U n i v e r s i t yo f F o r e s t r ya n d T e c h n o l o g y4 9 8S h a o s h a n S o u t h R o a d ，T i a n x i n D i s t r i c tC h a n g s h a H u n a n 4 10 0 0 4 ，P ．R ．C H I N AS u p e r v i s o rP r o

4、 f e s s o rJ I N X i a o l i n gM a y , 2 0 1 3杜仲組織培養(yǎng)及愈傷組織植株再生體系的建立摘要杜仲( E u c o m m i a u l m o i d e sO l i v ．) 是我國特有的經(jīng)濟(jì)和藥用植物，是國家二級保護(hù)植物。實(shí)驗(yàn)在唐亮的研究《杜仲優(yōu)良無性系快速微繁殖技術(shù)研究》的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了杜仲組織培養(yǎng)體系，著重建立了以愈傷組織誘導(dǎo)、愈傷組織誘導(dǎo)叢生芽、壯苗生根路線為基礎(chǔ)的植株再生

5、體系，為杜仲轉(zhuǎn)基因分子研究提供材料和技術(shù)平臺，同時獲得了大量杜仲優(yōu)良品種的苗木。實(shí)驗(yàn)采用杜仲優(yōu)良品種華仲5 號為材料，以成熟胚、幼嫩胚、葉片、子葉和莖段( 帶芽或不帶芽) 為外植體進(jìn)行了芽和愈傷組織的誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)、傷組織誘導(dǎo)叢生芽的形成、不定芽的增殖和芽的生根培養(yǎng)等研究，篩選了各個階段的適宜培養(yǎng)基，建立了杜仲組織培養(yǎng)技術(shù)體系。取得以下主要結(jié)果：1 ．成熟胚、幼嫩胚、葉片、子葉和不帶芽莖段等外植體都能夠直接誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，但它們適宜的

6、培養(yǎng)基配方不同。成熟胚：M S + B A 2 ．0m g ／L + N A A 2 ．5 m g ／L ，誘導(dǎo)率7 0 ％；幼嫩胚：M S + B A 0 。5 m g ／L + 2 ，4 一D 2 ．0m g ／L ，誘導(dǎo)率8 8 ．9 ％；葉片：M S + B A l ．0 m g ／L + N A A l ．0m g ／L ，誘導(dǎo)率6 6 ．7 ％；莖段：M S + B A2 ．0 m g ／L + N A A0 ．5 m g

7、／L ，誘導(dǎo)率1 0 0 ％；子葉：M S + B A0 ．5 ．1 ．0 m g ／L + N A A2 ．5 m g ／L ，誘導(dǎo)率8 8 ．9 ％。2 ．愈傷組織繼代培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基配方為：M S + B A1 ．5 m g ／L + N A A0 ．0 5 m g ／L 增殖系數(shù)2 5 0 ％和M S + N A A l ．0 m g ／L + T D Z 0 ．5 m g ／L ，增殖系數(shù)2 0 0 ％；適宜的愈傷組織繼代周期

8、為2 0 天。3 ．愈傷組織在M S + B A 1 ．0 m g ／L + N A A 0 ．0 5 m g ／L 的培養(yǎng)基上，能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽，誘導(dǎo)率8 8 ．9 ％，增殖系數(shù)3 土1 ．1 9 ，并且繼代2 次的愈傷組織誘導(dǎo)叢生芽的效果最好。4 ．成熟胚和帶芽莖段可以直接誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽，成熟胚的適宜培養(yǎng)基為M S + B A 0 ．5 m g ／L + N A A0 ．1m g ／L ，誘導(dǎo)率8 0 ％；帶芽莖段為：M S +