藥用旱生植物刺山柑懸浮培養(yǎng)體系建立及抗逆性初步研究.pdf

1、刺山柑在生態(tài)和經(jīng)濟方面都具有較大的開發(fā)利用價值。目前，由于自然分布少，資源量日漸下降等因素制約，影響了其在生產(chǎn)中的應用。植物細胞培養(yǎng)被認為是解決此資源危機的理想途徑。本文圍繞刺山柑愈傷組織聚集體理化性質(zhì)、懸浮培養(yǎng)過程中的生長及代謝特征、刺山柑適應逆境環(huán)境的初步機制和刺山柑植株揮發(fā)油成分及含量測定等基礎領域，開展了較為全面的研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 (1)根據(jù)細胞直徑的不同，分揀出3種不同大小的刺山柑細胞聚集體，對它們進行了

2、黃酮含量、相關酶活性及再培養(yǎng)曲線的測定。結(jié)果表明顆粒最小的細胞聚集體黃酮含量約為顆粒較大的細胞聚集體的2倍，并且其丙二醛含量、苯丙氨酸解氨酶及過氧化物酶的活性及再培養(yǎng)曲線均具有相同的變化趨勢。個體較小的與氧氣、培養(yǎng)基養(yǎng)分接觸充分，利于細胞生長與次生代謝物的積累。
　　 (2)對刺山柑細胞懸浮培養(yǎng)的生長過程和營養(yǎng)物質(zhì)消耗進行動態(tài)研究。結(jié)果表明：培養(yǎng)液的pH值在4.2-5.8之間變化，呈現(xiàn)先降后升的趨勢；培養(yǎng)基中的磷酸鹽、硝酸鹽基本

3、滿足刺山柑細胞的生長，大量元素的消耗速率為PO43->NH4+>NO3-在大量元素中無機磷消耗最快。細胞的生長與氮、磷元素的消耗以及細胞內(nèi)外蛋白含量變化相吻合。刺山柑細胞可溶性蛋白呈現(xiàn)單峰型，先升后降變化，與胞外可溶性蛋白有良好的線性關系。
　　 (3)研究了干旱脅迫對旱生植物刺山柑相關生理指標的影響，以考察其耐旱特征及抗旱機制。結(jié)果表明：4％-10％的濃度范圍內(nèi)，隨著PEG-8000脅迫濃度的增加和脅迫時間的延長，刺山柑愈傷組

4、織中丙二醛含量升高，可溶性蛋白含量先上升后降低，脯氨酸含量上升，過氧化物酶活性上升，質(zhì)膜過氧化作用加強，脂肪酸不飽和度增大。表明細胞膜系統(tǒng)和保護酶系統(tǒng)遭到破壞并表現(xiàn)出初步抗旱機制。PEG濃度大于10％時對細胞產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的傷害。
　　 (4)探討了溫度脅迫對刺山柑愈傷組織生理生化的影響。試驗結(jié)果表明，在低溫脅迫下，刺山柑細胞發(fā)生了質(zhì)膜過氧化作用，導致產(chǎn)物丙二醛含量升高，過氧化物酶活性上升；滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)可溶性糖、可溶性蛋白以及游離