復葉槭組織培養(yǎng)再生體系建立及其遺傳轉化初步研究.pdf

1、本研究通過不定芽和愈傷組織兩種途徑，首次建立了復葉槭的組織培養(yǎng)再生體系，并采用農桿菌介導法和針刺法首次對槭樹科植物進行了抗蟲基因的遺傳轉化，得到了經PCR和PCR-Sourthern檢測呈陽性的轉基因愈傷組織和轉基因植株。本論文研究的主要內容和結果如下： 1.復葉槭不定芽途徑再生體系的建立 (1)以莖節(jié)、頂芽為外植體，通過比較不同激素種類和濃度對增殖率和分化率的影響，篩選出適合不同外植體的最佳培養(yǎng)基和激素組合，從而建立起

2、復葉槭不定芽再生體系。結果表明，適合莖節(jié)和頂芽的增殖培養(yǎng)基均是MS基本培養(yǎng)基附加0.1mg/L6-BA和0.01mg/LNAA，分化培養(yǎng)基分別是附加0.1mg/LTDZ和0.01mg/L2,4-D的MS培養(yǎng)基和附加0.01mg/LTDZ的MS培養(yǎng)基，最佳的生根培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基附加0.1mg/LNAA，生根率為89％。 (2)以莖節(jié)為外植體，比較了液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)的效果，結果發(fā)現(xiàn)，在TDZ同一濃度下，液體培養(yǎng)比固體培養(yǎng)的分

3、化率高，產生不定芽的時間相對較早。 2.復葉槭莖段等誘導的愈傷組織途徑再生體系的建立以莖段、葉片、子葉、葉柄為外植體，通過比較不同激素種類和濃度對不同外植體愈傷組織的誘導和分化率的影響，篩選出適合不同外植體的最佳培養(yǎng)基和激素組合，從而通過愈傷組織再生途徑初步建立起復葉槭的組織培養(yǎng)再生體系。結果表明，不同外植體在不同培養(yǎng)基上誘導愈傷組織的顏色和質地略有差異，脫分化和再分化能力不同。莖段的脫分化和再分化能力相對最強，葉柄最差。適合莖

4、段再分化的最佳培養(yǎng)基是MS基本培養(yǎng)基附加0.0005mg/LTDZ和0.01mg/LNAA，分化率是22.8％，其他外植體脫分化后沒能再分化。 3.莖段等誘導的愈傷組織解剖學研究通過組織切片技術研究了不同顏色和質地的愈傷組織以及莖節(jié)在不同時期誘導的愈傷組織的內部結構，結果表明，不同顏色和質地的愈傷組織的細胞排列方式、細胞大小等不同，淺棕色疏松等淺色系的愈傷組織多為胚性愈傷組織，從而為從顏色和質地上確定復葉槭胚性愈傷組織奠定基礎。

5、莖節(jié)在不同時期的細胞分裂有一定差異，通過組織學觀察到了不定芽的形成多是經過愈傷組織途徑。 4.復葉槭遺傳轉化的初步研究(1)篩選了適合復葉槭不同轉化體的卡那霉素濃度。復葉槭的葉片、莖段和莖節(jié)、愈傷組織分別選用15mg/L、25mg/L、15mg/L作為篩選濃度較為適宜。比較了不同菌液濃度和感染時間對轉化率的影響。結果表明，用LB液體培養(yǎng)基和過夜培養(yǎng)的菌液以1：1稀釋后感染10min轉化率相對較高。 (2)通過農桿菌介導法