生姜的組織培養(yǎng)與農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系建立的研究.pdf

1、本論文研究以柳姜1號和魯大姜兩個生姜品種為材料，系統(tǒng)地研究了生姜優(yōu)良品種的組織快繁及試管姜誘導(dǎo)，建立起良好的培養(yǎng)體系。同時，結(jié)合農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化建立起遺傳轉(zhuǎn)化體系，成功的獲得了生姜GuS基因轉(zhuǎn)化植株，并進行了檢測，為今后的生姜組織培養(yǎng)與遺傳轉(zhuǎn)化研究提供了重要的參考依據(jù)。試驗結(jié)果表明： 1、柳姜1號莖尖使用0.1％升汞(HgCl<,2.)1 2min+70％酒精(CH<,3>CH<,2>OH)1min進行滅菌效果最好，污染率為

2、12.1％，分化率達73.5％，平均生成的芽數(shù)為2.46個；大姜莖尖使用O.1％升汞(HgCl<,2>)11min+70％酒精(CH<,3>CH<,2>OH)lmin進行滅菌效果最好，污染率為1 5.6％，分化率達79.3％，平均生成的芽數(shù)為2.58個。 2、不同基因型材料的誘導(dǎo)分化能力有差異，柳姜1號的誘導(dǎo)分化率為97.5％，平均生成的小芽數(shù)為2.55個；魯大姜的誘導(dǎo)分化率為84.17％，平均生成的小芽數(shù)為2.16個。

3、 3、不定芽的直接分化途徑可作為生姜組織培養(yǎng)的主要途徑；脫分化途徑產(chǎn)生的生姜愈傷組織分化頻率低，不利于生姜組織培養(yǎng)。 4、芽和莖是生姜組織培養(yǎng)的適宜材料，直接分化不定芽頻率高；愈傷組織的誘導(dǎo)分化以芽為外植體的芽分化率相對較高。 5、生姜芽的愈傷組織誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基以MS+6-BAl.0mg/L+2,4-D3.0mg/L為最佳。柳姜1號的愈傷組織誘導(dǎo)率、芽分化率、分化芽數(shù)分別為：84.6％、88.6％、5.49個；魯大姜為：

4、89.7％、90.4％和4.85個。 6、柳姜1號莖尖和芽誘導(dǎo)分化的最佳培養(yǎng)基為：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L，芽分化率均為100％，平均分化芽數(shù)分別為5.26個和5.02個；魯大姜的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L為最佳，芽分化率均達100％，平均分化芽數(shù)分別為5.99個、5.87個。 7、生姜組織培養(yǎng)的芽增殖以MS為基本培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果最好。8、在生姜繼代增

5、殖培養(yǎng)基中，添加15mg/L的椰子汁對不定芽的誘導(dǎo)有一定的促進作用。 9、不同的激素組合對生姜芽的繼代增殖效果不同，以6-BA3.0mg/L+NAA0.7mg/L+MET0.5mg/L+KT0.5mg/L的激素配比對柳姜1號的繼代效果最好；魯大姜則以6-BA3.0mg/L+NAA0.7mg/L+MET0.5mg/L+KT0.3mg/L最佳。 10、系統(tǒng)研究了蔗糖濃度、外源激素(6-BA、KT、NAA、MET、IBA)

6、、香豆素(Coumarin)、礦質(zhì)元素以及生長抑制劑(B9)等對生姜試管苗根狀莖誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，蔗糖濃度80g/L～110g/L是生姜試管苗根狀莖發(fā)育的必要條件；外源激素以6-BA優(yōu)于KT，低濃度的IBA有利于柳姜1號的根狀莖發(fā)育；而較高濃度的IBA對魯大姜根狀莖發(fā)育效果較好；培養(yǎng)基中添加生長抑制劑(B9)、香豆素(Coumarin)可以提高根狀莖平均單球重、平均直徑以及單株結(jié)姜數(shù)；適當提高誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的大量元素(大量元素為2MS

7、)可以提高根狀莖平均單球重、平均直徑以及單株結(jié)姜數(shù)。 11、生姜組培苗的生根壯苗培養(yǎng)以1/2MS+ABT-10.5mg/L+NAA10mg/L或1/2MS+ABT-11.0mg/L+NAA0.5mg/L為最佳培養(yǎng)基。 12、生姜具有根狀莖的無菌苗比普通組培無菌苗移栽效果更好。 13、生姜葉盤的Km基礎(chǔ)抗性濃度為8mg/L，生姜非轉(zhuǎn)化體在含Km的培養(yǎng)基中難以分化出根。 14、生姜外值體在菌液濃度OD值≈