白術再生體系建立與農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化.pdf

1、白術(Atractylodes macrocephala Koidz)為多年生菊科藥用植物。野生白術資源在逐年減少，大部分的藥用來源均為栽培品種。近年來白術栽培過程中受到的各種病蟲害的威脅，嚴重影響到白術的品質和產(chǎn)量。轉基因技術是遺傳改良的有效手段，利用轉基因技術導入抗病基因提高白術的抗病性值得探索。本實驗采用白術栽培品種，建立了高效的白術離體再生體系和農(nóng)桿菌介導的白術遺傳轉化體系。將分別來源于苜蓿斜紋夜蛾昆蟲桿狀病毒和甜菜夜蛾中的凋亡

2、抑制基因p35和iap導入白術中，獲得了轉基因植株。
　　本研究主要內容包括：⑴真葉、莖尖、下胚軸和上胚軸外植體誘導多芽的最佳培養(yǎng)條件為MS+TDZ0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.2 mg/L、0.2 mg/L，分化率分別可達47.5±3.96％、75.1±4.41％、78.7±7.11％、88.4±5.34％;其中上胚軸的繁殖系數(shù)最高可達15.9±0.64，是最佳的外植體。利用1/2MS+NAA0.1 mg/L可以促進多

3、芽生根，生根率可達90.3±0.43％。移栽成活率可達93.3％。⑵利用pBar-Gus載體建立了白術農(nóng)桿菌轉化體系，菌液濃度為0.4的條件下侵染20 min，共培時添加200μmol/LAS并共培2d條件下，PCR檢測表明轉化率達15.8％;轉化篩選后的抗性組織、多芽、根、T1代小花等GUS染色陽性。采用試紙條快速檢測T1代植株，bar基因實現(xiàn)表達，陽性率為76％。150 mg/LBasta溶液噴灑結果表明:轉基因植株對Basta抗性

4、顯著提高。⑶將目的基因p35和iap成功導入了白術，T0代植株PCR檢測轉化率為12.70％。;對PCR及試紙條檢測為陽性的植株進行灰霉病菌活體接種，結果發(fā)現(xiàn):在25個白術植株中9株對灰霉病抗性增強。創(chuàng)造了可利用的育種材料。⑷利用熒光定量PCR方法檢測了4株T0代轉pBar-Gus的植株，發(fā)現(xiàn)bar基因拷貝數(shù)為2-3個。對繁殖所得T1代植株進行PCR檢測，發(fā)現(xiàn)四個株系的分離比分別為3∶1、3.67∶1、3.75∶1、4.5∶1，表明一個