高羊茅再生體系的建立與農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究.pdf

1、本試驗分為高羊茅再生體系的建立和農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立兩部分試驗。再生體系的建立以“獵狗5號”、“上農(nóng)矮生高羊茅” 和“98-19” 3份高羊茅品種為供試材料，成熟種子胚為外植體，在MS基本培養(yǎng)基上分別添加不同2,4-D誘導(dǎo)濃度，2,4-D分別與BA、NAA不同配比進行愈傷組織誘導(dǎo)與分化試驗。探討各種激素對高羊茅愈傷組織誘導(dǎo)、分化的影響。結(jié)果表明：2,4-D濃度對愈傷組織的誘導(dǎo)起決定性作用，9mg/L為較佳誘導(dǎo)濃度。在2,4-D濃

2、度為9mg/L時，三個品種的愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到最高。高羊茅的轉(zhuǎn)化體系的建立，以農(nóng)桿菌C58pMP90(PBI121)為供試菌株，以成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織作為受體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將已克隆的與植物的耐旱、耐鹽有關(guān)的膽堿氧化酶基因，CMO，導(dǎo)入獵狗5號、上農(nóng)矮生高羊茅、98-19三個高羊茅品系。通過對農(nóng)桿菌侵染過程中的影響因素菌液濃度和侵染時間進行條件優(yōu)化，提高農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織的效率。研究結(jié)果顯示，適宜的菌液OD600 值為0.6左右，在