紫花苜蓿再生體系的建立及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的BADH基因轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、紫花苜蓿(Medicago sativa)為生長(zhǎng)面積最大，利用價(jià)值最高的優(yōu)質(zhì)牧草。如何進(jìn)一步提高其耐鹽堿抗旱特性，擴(kuò)大其種植范圍，是當(dāng)前苜蓿生產(chǎn)面臨的重要研究課題，基因工程的發(fā)展和應(yīng)用為苜蓿抗鹽育種開辟了一條新的途徑。本研究探討了和田、阿爾岡金、甘農(nóng)1號(hào)、甘農(nóng)3號(hào)、甘農(nóng)4號(hào)、隴中、德福、牧歌、潤(rùn)不勒、三得利10個(gè)苜蓿品種組織培養(yǎng)程序，確定出再生能力最強(qiáng)的品種及外植體。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化BADH(甜菜堿醛脫氫酶)基因，建立了一套農(nóng)桿菌介

2、導(dǎo)苜?；蜣D(zhuǎn)化的優(yōu)化體系，主要研究結(jié)果如下： 1.再生體系的建立試驗(yàn)表明，苜蓿不同品種間再生能力差異較大，在試驗(yàn)中所采用的10個(gè)品種中，再生能力的強(qiáng)弱依次為：甘農(nóng)4號(hào)>牧歌>隴中>三得利>阿爾岡金>德福>潤(rùn)不勒>甘農(nóng)3號(hào)>甘農(nóng)1號(hào)>和田。 胚軸是紫花苜蓿最佳的愈傷誘導(dǎo)外植體材料，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+2mg/L12,4-D+0.25mg/LKT+30g/L蔗糖，愈傷組織誘導(dǎo)的最佳品種是甘農(nóng)4號(hào)。10個(gè)品種最適的分化培養(yǎng)基

3、為MS+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+20g/L蔗糖。最佳誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基為1/2MS+0.5mg/LNAA十15g/L蔗糖。 綜合考慮各品種再生能力的強(qiáng)弱，最后確定以甘農(nóng)4號(hào)苜蓿作為基因轉(zhuǎn)化受體。 2.BADH基因轉(zhuǎn)化體系的建立以侵染后甘農(nóng)4號(hào)號(hào)外植體的抗性愈傷組織出愈率、抗性芽形成率以及抗性苗的獲得為指標(biāo)建立了轉(zhuǎn)化體系。 以培養(yǎng)7天的甘農(nóng)4號(hào)的胚軸為受體材料，預(yù)培養(yǎng)3天，用于轉(zhuǎn)化的侵染時(shí)間為10