紫花苜蓿再生體系的建立及農桿菌介導的BADH基因轉化研究.pdf

1、紫花苜蓿(Medicago sativa)為生長面積最大，利用價值最高的優(yōu)質牧草。如何進一步提高其耐鹽堿抗旱特性，擴大其種植范圍，是當前苜蓿生產面臨的重要研究課題，基因工程的發(fā)展和應用為苜蓿抗鹽育種開辟了一條新的途徑。本研究探討了和田、阿爾岡金、甘農1號、甘農3號、甘農4號、隴中、德福、牧歌、潤不勒、三得利10個苜蓿品種組織培養(yǎng)程序，確定出再生能力最強的品種及外植體。利用農桿菌介導法轉化BADH(甜菜堿醛脫氫酶)基因，建立了一套農桿菌介

2、導苜?；蜣D化的優(yōu)化體系，主要研究結果如下： 1.再生體系的建立試驗表明，苜蓿不同品種間再生能力差異較大，在試驗中所采用的10個品種中，再生能力的強弱依次為：甘農4號>牧歌>隴中>三得利>阿爾岡金>德福>潤不勒>甘農3號>甘農1號>和田。 胚軸是紫花苜蓿最佳的愈傷誘導外植體材料，最佳誘導培養(yǎng)基是MS+2mg/L12,4-D+0.25mg/LKT+30g/L蔗糖，愈傷組織誘導的最佳品種是甘農4號。10個品種最適的分化培養(yǎng)基

3、為MS+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+20g/L蔗糖。最佳誘導生根的培養(yǎng)基為1/2MS+0.5mg/LNAA十15g/L蔗糖。 綜合考慮各品種再生能力的強弱，最后確定以甘農4號苜蓿作為基因轉化受體。 2.BADH基因轉化體系的建立以侵染后甘農4號號外植體的抗性愈傷組織出愈率、抗性芽形成率以及抗性苗的獲得為指標建立了轉化體系。 以培養(yǎng)7天的甘農4號的胚軸為受體材料，預培養(yǎng)3天，用于轉化的侵染時間為10