菊花再生體系的建立及農(nóng)桿菌介導(dǎo)綠色熒光蛋白（GFP）基因轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、該研究以菊花(Dendranthema morifolium)品種'日本黃'、'陽光'、'國華積富'為試驗材料,研究了不同品種、不同激素濃度配比對菊花愈傷組織、不定芽和根誘導(dǎo)的影響.優(yōu)化了菊花再生條件,獲得了菊花葉片高效再生體系.試驗結(jié)果表明,品種'日本黃'的再生能力明顯高于其他兩個品種,并篩選出誘導(dǎo)愈傷組織、不定芽和根的最佳培養(yǎng)基.研究中同時也發(fā)現(xiàn),品種'日本黃'葉片接種在MS+NAA(1mg/L)+6-BA(3mg/L)培養(yǎng)基上,經(jīng)

2、過一段時間的培養(yǎng),可直接再生出不定芽,并且芽誘導(dǎo)率高達100％,繁殖系數(shù)達8.54,再生芽在1/2MS+NAA(0.2mg/L)+IBA(0.2mg/L)培養(yǎng)基上經(jīng)過10天左右可誘導(dǎo)出根,生根率可達100％,完全可以滿足遺傳轉(zhuǎn)化的需要.在建立了菊花品種'日本黃'再生體系的基礎(chǔ)上,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法進行遺傳轉(zhuǎn)化研究.試驗結(jié)果表明,葉盤預(yù)培養(yǎng)、農(nóng)桿菌菌液OD600值、侵染時間和共培養(yǎng)時間均對菊花的遺傳轉(zhuǎn)化率有較大影響.同時得出不經(jīng)過

3、預(yù)培養(yǎng)、OD<,600>=0.6、侵染10分鐘和共培養(yǎng)4天菊花遺傳轉(zhuǎn)化率最高,同時考慮了濾紙帽法對轉(zhuǎn)化率的影響.共培養(yǎng)后把葉盤轉(zhuǎn)入MS+NAA(1mg/L)+6-BA(3mg/L)+Kana(30mg/L)培養(yǎng)基上進行分化篩選培養(yǎng).30天后可分化出不定芽,把不定芽轉(zhuǎn)到MS+NAA(1mg/L)+6-BA(3mg/L)+Kana(50mg/L)培養(yǎng)基上進行抗性芽的篩選,轉(zhuǎn)到1/2MS+NAA(0.2mg/L)+IBA(0.2mg/L)+K