旱柳基因轉化再生體系的建立和農桿菌介導的BADH基因轉化的研究.pdf

1、本試驗所用旱柳品系Q106是山東省東營市的地方優(yōu)良新品種,與其它旱柳品種相比,具有一定的抗旱、耐鹽、耐瘠薄、抗風沙能力,并且有速生、成材早等優(yōu)點.在生態(tài)環(huán)境中起著很重要作用,同時也是良好的園林綠化材料.土壤鹽漬化是影響農業(yè)生產和生態(tài)壞境的一個重要因素.它使大量的國土荒蕪,生態(tài)環(huán)境更加惡劣.因此,鹽堿地資源開發(fā)利用有著及其重要的社會意義.旱柳的最高耐鹽性為4‰,超過此極值,其生長受到限制、甚至死亡.對此本實驗在利用旱柳組培再生體系建立的基

2、礎上,進行了農桿菌(Agrobacterium tumefacien)介導的甜菜堿醛脫氫酶基因(BADH)導入旱柳的研究,目的是進一步提高旱柳的耐鹽性和抗旱性,擴大其適宜的種植范圍.主要研究結果如下:1.旱柳再生體系的建立:以帶芽莖段進行無菌材料擴繁時MS+BA0.4 mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖30 g/L和BA0.4 mg/L+NAA0.4 mg/L+蔗糖30 g/L;MS+BA0.4 mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗

3、糖30 g/L和BA0.4 mg/L+IBA0.2 mg/L+蔗糖30 g/L交替使用為最佳;以莖段作為外植體在附加NAA0.25mg/L+BA1.0mg/L的MS培養(yǎng)基上誘導愈傷組織效果最好,芽分化率可達88.3﹪;將出芽愈傷組織塊接種到附加NAA0.15mg/L+KT3.0mg/L的MS分化培養(yǎng)基上效果最佳,平均分化芽數(shù)為15.4個;壯芽培養(yǎng)基為MS+BA0.2 mg/L+NAA0.1 mg/L;生根培養(yǎng)基為1/2MS附加GA30.

4、2 mg/L+NAA0.5 mg/L,生根效果好.2.BADH基因轉化體系的建立.400 mg/L的頭孢酶素作為抗菌素抑制和去除農桿菌最佳,且對愈傷組織和組培苗生長影響不大;在Kan 10 mg/L時愈傷組織褐化死亡率97﹪,卡那霉素(Kan)15 mg/L時組培苗白化死亡率為100﹪;利用農桿菌介導,以愈傷組織作為外植體進行侵染,侵染時加入10 mg/L乙酰丁香酮,用1/2YEB和1/2MS液體培養(yǎng)基活化農桿菌;菌液濃度OD值0.3-