農(nóng)桿菌介導(dǎo)的DHAR基因轉(zhuǎn)化甜瓜和蘋果的研究.pdf

1、西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)的DHAR基因轉(zhuǎn)化甜瓜和蘋果的研究姓名：馮鳳娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：馬鋒旺20080501S T U D ⅢS O N A G R O B A C T E R n H 訂一M E D 弘口匝D1 R A N S F C } R A 五觚C I N O F A P P L E A 佃 Ⅳ叫S K 姍幻I N Ⅵ哪D H A R G E N EA B S T R A C TU n d

2、c r t l l ea d V e r s ec i r c u m s t a n c e f b r c e s ，p l 鋤t sc a n p r o d u c e m a L s s i v eR O S w h i c h h a L sv e 哆s 仃0 n 翻yp o i s o n o u sf h n c t i o nt o t 1 1 e p l a 工l t ．T h e R o S s c a v 饑百n

3、 gs y s t 鋤m a i n 謝h si t sn o 衄a 1p h y s i 0 1 0 酉c a l 如n c t i o n o f p l a I l t s ．M e l o n a l l da p p l 鼯a r e0 1 l rf ．a(chǎn) v o r i t e 丘1 l i t sb e c a u s e t h e y h a V e al l i c et a S t ew i m h i 曲c o

4、n t e n t so f n u t r i t i V ec o m p o n 鈕t s ．R e s e a O h e r sh o p et o e n h a n c et h eR o Se l 沛i n a t i o n e n z y m ea c t i V i t y t l l r o u 曲t h e g e l l e t i c e n g i l l e e 血gm e t h o d ．T h u

5、 s s h a 印e n s m ea b i l i 夠o ft h ea n t i —o x i d a t i o nf o r c e s 鋤d b r e e d st h ev 撕e t y w h i c h h 嬲m e 1 1 i 曲r e s i s t a n c e ．nw o u l d b ea I s oh e I p 向It og e tm o r e i 1 1 f 0 衄撕o na b o u t

6、 t h er o l eo fD H A R p l a y i l l gi nA s A ．G S Hc y c l ea n d i t sm c t a b 0 1 i s m p a m w a y ．T h e m a i n I ．e s u l t sw e r e a sf 1 0 U o w s ：1 A e f j f i c i e n tr e g 鋤e r a t i o ns y s t 鋤o f p 1

7、 鋤t l e t sw 邪e s 訕l i s h e dw i t h c o t y l e d o na n d 1 e a v e si nm e l o n ( C h c “慚捃聊P 腸L ．c v ．X i t i a n y i h a o ) ．T h e s ef a c t o r st h a ti n c l u d ec o n c e n 仃a t i o no f p l a n tg r o w t

8、l lr e g u l a t o r s ，a g e ，w a y so fi 1 1 0 c I l l a t i o n 姐dp e r i o d o fd a r kw c r e s t u d i e d ．W i m t h ec o t y l e d o n sg r o w i n g f o r 5 - 7 d a Sa c C e p t ％m e b e s tm c d i u m o f a d v

9、 e n t i t i o u sb u d r e g e n e r a t i o n i sM S + 0 ．8m ∥L 6 一B A ．W i Ⅱlt h el e a V e sg r o w i l l gf o r t w o 、碥e ba sa c c e p t ％t h e b e S tm e d i u m o fa d V 饑t i t i o u s b u dr e g e n e r a t i o

10、n i s M s + 1 ．0m ∥L 6 一B A ．C u l t 嘶n gi n n o m a lp h o t o p 缸o(hù) d ，a b a X i a ls i d et o u c h i n g m e d i a ，m ed i ‰t i a t i o n r a _ t eo f t 、7 l ，o e x p l a n t sw a S m a x i m u m r e a c h i n glo o ％

11、．1 1 1 e o p t i c a lC 0 n c e n t r a t i o n so f p l 趾tg r o w t hr e g u l a t o r sw e r e0 ．0 5m ∥L 6 一B A d 嘶n g 也es t a g eo f b u d s t r e t c h i n g ．I nt h e m e d i u ml ／2 M S + L A A 0 ．2m ∥L ，也ee l o n

12、g a t e d s h o o t sr o o t e d a tt h e r a t e o f l 0 0 ％．2P l a n t e X p r e s s i o n V e c _ t o rc a n 蜘n g d e h y d r o a s c o r b a t r e d u c t _ a S eg e n e ( D H A R 蜀∞m 脅婦如規(guī)e s 療c 口B o e _ k 1 1 ．c v ．

13、G a l a ，G e I l b a I l k a c c e s s i o n m I m b e r ：D Q 3 2 2 7 0 6 ) w 弱c o n s 砸1 c t e d ，i d e n t i f i c a t e da n d t h e n №o d u c c d i I l t o4 9 ，o 施c f e 一“m 加m 咖c f e 瑚．3W i 也m e C o t y l e d o n e

14、x p l a n t s ，w es t u d i e d t h e f ．a(chǎn) c t o r st h a t a f f e 曲e dt r a n s f 0 咖a t i o n 豫t i o o f么礦D 6 口c f P r f “m - n l e d i a t c dm e m o d ．T h e o p t i m a lC 0 n d i t i o n sw h i c h b a s c d o n t

15、 1 1 er e s u l t so f P C R缸dm e m m l b e ro f h y 掣1 0 m y c i n B ·r e s i s t a n tp l a n t sw e r ei n V e s t i g a t e d ．T h e r e s u l ts _ h o w e d t h a tt 1 1 e s u i l t d b l e ∞n d i t i o 璐o f 吼l