含loxP農(nóng)桿菌介導(dǎo)Bt基因轉(zhuǎn)化水稻的研究.pdf

1、水稻是最重要的糧食作物之一。培育抗蟲品種是水稻品種選育的重要目標(biāo)。近年來(lái),植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展為培育高效抗蟲水稻品種開(kāi)辟了新的途徑。Bt基因是目前應(yīng)用最為廣泛的高效抗蟲基因。
　　目前多數(shù)轉(zhuǎn)化方法都是通過(guò)標(biāo)記基因篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞和非轉(zhuǎn)化細(xì)胞。標(biāo)記基因在提高轉(zhuǎn)化子篩選效率的同時(shí),可能會(huì)帶來(lái)一些潛在的安全性問(wèn)題。因此建立無(wú)選擇標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因體系是轉(zhuǎn)基因研究的重要方向。來(lái)自噬菌體P1的Cre/loxP重組系統(tǒng)是一種有效的標(biāo)記刪除方法。在這個(gè)系

2、統(tǒng)中,Cre酶可以精確的識(shí)別和切割位于兩個(gè)loxP位點(diǎn)之間的篩選標(biāo)記基因。
　　本研究我們使用了能定向切除潮霉素抗性標(biāo)記基因loxP位點(diǎn)識(shí)別系統(tǒng),利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功地將bt抗蟲基因?qū)氚不罩髟运酒贩N“晚粳97”中,主要結(jié)果概括如下:
　　1.本文研究了水稻組織培養(yǎng)的起始材料和培養(yǎng)條件:幼胚的出愈率明顯高于成熟胚;愈傷組織誘導(dǎo)的2,4-D最佳濃度為2.0 mg·L-1,在此濃度下誘導(dǎo)的愈傷組織生長(zhǎng)能力強(qiáng);愈傷組織分化前適度