大豆莖尖再生系統(tǒng)的研究及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Bt基因的轉(zhuǎn)化.pdf

1、大豆是重要的糧食作物，是植物蛋白的主要來(lái)源，在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上占有十分重要的地位，大豆食心蟲一直嚴(yán)重危害著我國(guó)的大豆生產(chǎn)。植物基因工程及相關(guān)生物技術(shù)的持續(xù)發(fā)展，為大豆遺傳育種開(kāi)辟了一條嶄新的途徑。但大豆愈傷組織難以分化并形成再生植株，大豆一直是最難轉(zhuǎn)化的植株之一。建立高效的再生體系并能成功的應(yīng)用于外源基因的導(dǎo)入是大豆遺傳轉(zhuǎn)化的核心所在。本研究通過(guò)對(duì)大豆再生過(guò)程中各個(gè)因素的優(yōu)化，建立了高效的大豆莖尖再生轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，并通過(guò)農(nóng)桿菌的介導(dǎo)成功的將Bt

2、基因?qū)氪蠖?。其主要結(jié)果如下： 1.大豆莖尖經(jīng)過(guò)MSB+6-BA3.0mg/L+IBA0.15mg/L預(yù)培養(yǎng)，再植入MSB+6-BA0.5mg/L+IBA0.02mg/L培養(yǎng)基中，2周后外植體項(xiàng)部有大量叢生芽出現(xiàn)，待芽伸長(zhǎng)到2～3cm切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，兩周左右有根長(zhǎng)出，待根健壯移栽可得到完整的再生植株，此再生體系歷時(shí)5～7周比子葉節(jié)再生體系在周期上略有縮短。 2.大豆品種對(duì)農(nóng)桿菌的敏感性普遍偏低，并且在基因型之間存在顯

3、著差異，這種差異和大豆再生頻率在基因型之間的差異有一定的相關(guān)性。 3.農(nóng)桿菌的感染時(shí)間和共培養(yǎng)時(shí)間均對(duì)大豆的轉(zhuǎn)化有明顯的影響，感染時(shí)間以12分鐘左右為宜；共培養(yǎng)時(shí)間以2～3天為宜。感染時(shí)間和共培養(yǎng)時(shí)間之間存在一定的交互影響，在本試驗(yàn)條件下，兩者的最佳組合為感染12分鐘共培養(yǎng)60小時(shí)。 4.感染之前的預(yù)培養(yǎng)能提高莖尖的轉(zhuǎn)化頻率，最適宜的預(yù)培養(yǎng)為1d左右。 5.在農(nóng)桿菌浸染的時(shí)候通過(guò)超聲波的輔助處理，能在外植體上制造