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1、大豆(Glycine max(L.)Merr)是植物蛋白和食用油脂的重要來(lái)源,其再生體系的建立和遺傳轉(zhuǎn)化的研究受到了廣泛的重視,但其遺傳轉(zhuǎn)化相對(duì)困難,制約了大豆性狀的改良。
外源基因成功導(dǎo)入大豆依賴于高效的受體系統(tǒng),即再生系統(tǒng)和適宜的轉(zhuǎn)化方法相結(jié)合。本文利用含有pCambia1305.2和pZY102植物表達(dá)載體的農(nóng)桿菌菌株 EHA101和EHA105,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的子葉節(jié)和胚尖轉(zhuǎn)化方法,將報(bào)告基因 GUS基因?qū)氪蠖蛊贩N黑
2、農(nóng)37和黑農(nóng)44中,并且利用GUS化學(xué)組織染色法對(duì)轉(zhuǎn)化各個(gè)過(guò)程進(jìn)行檢測(cè),進(jìn)一步優(yōu)化轉(zhuǎn)化條件。通過(guò) GUS組織化學(xué)染色法、PCR、Southern blot檢測(cè)等手段,鑒定出 T0代轉(zhuǎn)化植株。結(jié)果表明,在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的子葉節(jié)轉(zhuǎn)化系統(tǒng)中,大豆的轉(zhuǎn)化效率穩(wěn)定接近1%;而農(nóng)桿菌介導(dǎo)的胚尖轉(zhuǎn)化系統(tǒng)中,共獲得 PCR陽(yáng)性植株3株,轉(zhuǎn)化效率為0.5%-1.0%。
為優(yōu)化農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆胚尖和子葉節(jié)轉(zhuǎn)化體系,本文對(duì)不同受體品種進(jìn)行了篩選,同時(shí)在
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