農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Bt、CBF1基因?qū)︸R鈴薯的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Bt、CBF1基因?qū)︸R鈴薯的遺傳轉(zhuǎn)化姓名：叢培琳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：盧翠華20070620T h e G e n e t i c T r a n s f o r m a t i o no f B t a n d C B F 1 G e n e s i nP o t a t o V i a A g r o b a c t e r i u m - m e d i a t i o

2、nA b s t r a c tA r e g e n e r a t i o ns y s t e m a v a i l a b l ef o rp o t a t ot r a n s f o r m a t i o nw a se s t a b l i s h e dc o n s i d e r i n gb ys e v e r i a lf a c t o r s ，s u c ha s t h ek i n d a n

3、 dc o n c e n t r a t i o no f d i f f e r e n t p h y t o h o r m o n e sa n db a c t e r i c i d e s ,t h ec o n c e n t r a t i o no f s u c r o s ea n d a g a r , t h et i m eo f c o - c u l t u r e ，t h e e f f e c

4、to f s e l e c t i o n ．I n t h i ss t u d y ,B t - C r y Va n dC B F Ig e n e s W e l ' et r a n s f e r r e d i n t o D o n g n o n 9 3 0 3 ，am a i nl o c a l c u l t i v a r s ，w i t hA g r o b a c t e r i u m - m

5、 e d i a t e d m e t h o d ．T h ee x p l a n t aw e 他m i c r o t u b e rd i s c s ．T h c t r a n s g e n i c p l a n t sw e r e t e s t e db yP C R a n dP C R - S o m b e r n ，a n d t h e yw e r e c o n f i r m e d t o b

6、 e i n t e g r a t e di nt h eg c n o m eo f p o t a t o ．n ”m a i nr e s u l t s w e r e s h o w e d ∞f o l l o w i n g ：l T h e o p l i m a l r e g e n e r a t i o nm e d i u m f o rt u b e r d i s cW a sM S + 3 ．5 m g

7、 ／Lz T + 1 ．0m g ／L I A A ．T h e h i g h e s t r a t eo f i n d u c i n gs h o o t i s 8 9 ．8 5 ％．T h eb e s tp h y s i o l o g i c a le s t a t eo f t u b e r e x p l a n tf o rt r a n s f o r m a t i o ni st h r e em o

8、 n t h o f r e s t in gs t a g e ．m c o n c e n t r a t i o n o f s u c r o s ea n da g a r i n b a s i cc u l t u r em e d i u mi s 3 0 班a n d0 ．7 ％．2T h eo p t i m a l e o n d i t i o n s o fA g r o b a c t e r i u m —

9、m e d i a t e dm e t h o dh a dn o d i f f e r e n c ei n t h ei n t e n t i o n o fg e n e ．B o t h o fC r y V g o n e a n d C B F ! g e n e ，t h e o p t i m a l c o n c e n t r a t i o n o fA g r o b a c t e r i u mW a

10、 S O D 6 c o O ．5 ．t h eo p t i m a l t i m eo f i n f e c t i o nW a S 5m i n t a e s ．I nt h i sc o n d i t i o n ,t h er a t eo f t u b e r d i s cw i t hC r y Vg o n eW a s 6 1 ．9 0 ‰t h e r a t eo f t u b e r d i s

11、cw i t hC B F lg a n e w a s6 8 ．3 3 ％。b o t ho f t h e m ，t h e r a t eo f p o l l a t i o n w e r el o w ．3C o - c u l t u r el i m eh a dg r e a ti n f l u e n c eO na e t i v i t yo f g o n e ．1 1 1 eo p t i m a lc o

12、 - c u l t u r et i m eo fD o n g n o n 9 3 0 3 w i t h C r y V g o n e W a S 6 0h o u r sa n d t h a to f C B F Ig e n e W a S 3 6h o u r s ．4 I nt h ec o m p a r a t i v ee x p e r i m e n to f s e v e r a lb s c t e d

13、 c i d e s ，t h ee r i e c t i v ec o n c e n t r a t i o n w i t hC e f o t a x i m e s o d i u m m a d e i nC h i n a ：f o rC r y V g e l 3 eI f i $ 4 0 0 m 扎f o r C B F lg e n e W a S 5 0 0 m # L ． m b e s t o n ew 淞C

14、 e f o t a x i m es o d i u mm a d e i n U S A , a n d ．杠e f f e c t i v ec o n c e n t r a t i o n w a s1 5 0 m g ／L f o rb o t hC r y V a n dC B F Ig e n e s ，w h i c h d i d n ' th a v en e g a t i v ee f f e c tt

15、 ot h eg r o w t h o fe x p l a n t s ．5n ∞m a n n e ro f s e l e c t i o nw a sc o n f i r m e ds e v e nd a y sl a t e r ．K a n a m y c i nW a S u s e d 囂t h es e l e c t i v ea g e n t ．T h ec o n c e n t r a t i o nW

16、 a S1 0 0 m g ／Lf o r t h e t u b e r d i s c sa tt h e s t a g eo f s h o o t a n dr o o tf o r m a t i o n ．6T t a n s f o r m a n t sw e r e a t t a i n e df o rC r y Vg e n e i nt l l i se x p e r i m e n t , i nw h

17、i c h 2 1 p l a n t sw e t ep a S s e dr o o t a g e 低a n l O O m g ／L ) ，a n di n w h i c h1 0W o m f o r m a n t sW a l ' e c o n f i r m e dh y t h et e s to fP C Ra n dP C R - S o u t b e mb l o t t i n gt o b et

18、 r a n s g e n i c p l a n t s ．9 6t r a n s f o r m a n t sw e r ea t t a i n e d f o rC B F l g o n ei n t h i se x p e r i m e n t , i nw h i c h 3 1p l a n t sw a t ep a s s e dr o o t a g e ( K a n l 0 0 r a g ／L )

19、, a n d i nw h i c h1 5t r a m f o r m a n t sw o r ec o n f i r m e db y t h et e s to fP C Ra n dP c R - S o u t h e r nb l o t t i n gt ob et r a r t s g e n i cp l a n t s ．B o t hC r y Vg o n ea n dc B F l g e n e s