農(nóng)桿菌介導(dǎo)CBF基因番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系初探.pdf

1、番茄是一種世界性經(jīng)濟(jì)作物，有關(guān)番茄組織培養(yǎng)與遺傳轉(zhuǎn)化報道較多，但由于番茄的再生能力因基因型的不同而存在著較大的差異，不同基因型番茄的培養(yǎng)周期、培養(yǎng)條件均不相同，需對每個特定的對象建立一套高效再生系統(tǒng)。同時番茄轉(zhuǎn)化工作中仍存在農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化和再生效率低，重復(fù)性差等問題，且不同番茄品種對農(nóng)桿菌侵染的敏感性不同，因此，仍需要進(jìn)一步完善轉(zhuǎn)化體系和優(yōu)化轉(zhuǎn)化方法，提高轉(zhuǎn)化效率和實用性。
　　 本文以番茄品種“萊紅l號”子葉和下胚軸為試材，進(jìn)

2、行離體培養(yǎng)再生體系研究。結(jié)果表明，最適于“萊紅1號”愈傷組織形成和不定芽分化的條件是:蔗糖濃度20-30g·L-1，6-BA濃度1.0mg·L-1，附加IAA2.0mg·L-1和0.1mg·L-1，同時暗培養(yǎng)10d后轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng)對愈傷的形成和分化最優(yōu)。
　　 抗生素敏感性試驗，番茄的潮霉素抗性水平為15mg·L-1，卡那霉素抗性水平為60mg·L-1;用根癌農(nóng)桿菌EHA105作為介導(dǎo)菌株時，可選用羧芐青霉素或者頭孢霉素400mg

3、·L-1來抑菌，用根癌農(nóng)桿菌LBA4404作為介導(dǎo)菌株時，可選用羧芐青霉素350mg·L-1來抑菌。
　　 利用GUS基因的瞬時表達(dá)效率對影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化效率的因素進(jìn)行了研究:外植體長度在5mm左右有利于愈傷組織的形成;番茄外植體預(yù)培養(yǎng)1-2天利于轉(zhuǎn)化率的提高;農(nóng)桿菌菌液濃度對轉(zhuǎn)化效率也有影響，隨著菌液濃度的增大，轉(zhuǎn)化效率有提高的趨勢，在OD600=0.4時，轉(zhuǎn)化效果最高;侵染時間以8min最佳;在共培養(yǎng)基中添加50μmo