農(nóng)桿菌介導BDN1基因轉化馬鈴薯抗旱性研究.pdf

1、本研究以馬鈴薯品種克新18號和東農(nóng)303的脫毒微型薯為研究對象，用農(nóng)桿菌介導法將抗旱基因BDN1轉入馬鈴薯，經(jīng)PCR和Southern blot檢測，證明BDN1基因已轉入馬鈴薯基因組中，經(jīng)半定量RT-PCR檢測，證明BDN1基因在馬鈴薯基因組中正常轉錄。試驗對激素配比濃度、脫菌劑種類與濃度、共培養(yǎng)時間及選擇壓進行了研究，建立了高效的馬鈴薯再生及遺傳轉化體系。試驗通過對轉基因植株的相對含水量、脯氨酸含量、丙二醛含量、葉綠素含量、超氧化物

2、歧化酶及過氧化物酶活性的測定，初步驗證了轉基因植株對水分脅迫的抗性比對照植株有所提高。其主要研究結果如下:
　　 1.確定了薯塊再生培養(yǎng)基為MS+ ZT4 mg/L+ IAA1mg/L，克新18號出芽率82.61％，東農(nóng)303出芽率86.36％。
　　 2.確定了農(nóng)桿菌菌液侵染濃度OD600=0.7，侵染時間5 min?？诵?8號薯塊出芽率83.33％，污染率12.5％;東農(nóng)303薯塊出芽率90.91％，污染率9.09％

3、。確定了克新18號薯塊以共培養(yǎng)3d轉化效果好，薯塊出芽率80％，東農(nóng)303薯塊共培養(yǎng)2d轉化效果好，薯塊出芽率85％;污染率10％。
　　 3.對羧芐青霉素和進口頭孢噻肟鈉的不同濃度進行了比較試驗，確定了羧芐青霉素的有效抑菌濃度300 mg/L，進口頭孢噻肟鈉的有效抑菌濃度150 mg/L。
　　 4.采用的抗性選擇劑為卡那霉素(Kan)，篩選方式為延遲7d篩選，結果表明薯塊芽誘導階段Kan濃度100 mg/L，生根階段

4、的Kan濃度125 mg/L。
　　 5.克新18號共獲得50個抗性植株，26株通過了生根篩選，其中13株PCR呈陽性，Southern blot雜交4株有雜交信號;東農(nóng)303獲得90個抗性植株，35株通過了生根篩選，其中27株PCR呈陽性，Southern blot雜交4株有雜交信號，說明目的基因BDN1已經(jīng)整合到馬鈴薯基因組中。進一步的半定量RT-PCR檢測結果表明目的基因BDN1在馬鈴薯抗性植株中得到表達。