農(nóng)桿菌介導(dǎo)的BcBCP1基因轉(zhuǎn)化馬鈴薯抗旱性研究.pdf

1、本研究以馬鈴薯品種黃麻子的脫毒微型薯為外植體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將抗旱基因BcBCP1轉(zhuǎn)入馬鈴薯中，經(jīng)PCR和Southernblot檢測(cè)證明BcBCP1基因已轉(zhuǎn)入馬鈴薯基因組中。試驗(yàn)建立了高效的馬鈴薯再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系。對(duì)影響遺傳轉(zhuǎn)化因素激素種類與濃度、脫菌抗生素種類與濃度、共培養(yǎng)時(shí)間、篩選方式等進(jìn)行了研究，通過(guò)對(duì)抗性植株相對(duì)含水量、葉綠素含量，脯氨酸含量測(cè)定，初步驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株對(duì)水分脅迫的抗性比對(duì)照有明顯提高。主要研究結(jié)果如

2、下： 1.薯塊再生培養(yǎng)基確定為MS+ZT4mg/L+IAA1mg/L，出芽率為86％。 2.當(dāng)農(nóng)桿菌菌液濃度為OD600=0.5，侵染時(shí)間為5min時(shí)，黃麻子的出芽率最高達(dá)87.19％，此時(shí)污染率較低僅為1.2％。 3.共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率影響很大，黃麻子薯塊以共培養(yǎng)2d時(shí)轉(zhuǎn)化效果最好，薯塊出芽率達(dá)到了83.97％，且污染率僅為6.77％。 4.對(duì)不同產(chǎn)地脫菌抗生素的濃度進(jìn)行了比較試驗(yàn)，國(guó)產(chǎn)頭孢噻肟

3、鈉對(duì)BcBCP1基因的有效抑菌濃度是400mg/L，進(jìn)口頭孢噻肟鈉對(duì)BcBCP1基因的有效抑菌濃度為150mg/L，且在有效的抑菌濃度下對(duì)外值體無(wú)不良影響。 5.試驗(yàn)采用的抗性選擇劑為草丁膦(PPT)，篩選方式為延遲7d篩選，結(jié)果表明薯塊芽誘導(dǎo)階段PPT濃度為4mg/L，生根階段的PPT濃度為5mg/L。 6.目的基因BcBCP1試驗(yàn)共獲得72株P(guān)PT抗性植株，其中35株通過(guò)了生根篩選(PPT5mg/L)，PCR檢測(cè)結(jié)果

4、表明有14株呈陽(yáng)性，進(jìn)一步的Southernblot雜交檢測(cè)中有6株檢測(cè)有雜交信號(hào)，說(shuō)明基因已經(jīng)整合劍馬鈴薯基因組中，外源基因主要是單拷貝插入。 7.對(duì)雜交呈陽(yáng)性的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了生物學(xué)的檢測(cè)，將6個(gè)黃麻子轉(zhuǎn)基因植株及非轉(zhuǎn)基因?qū)φ者M(jìn)行干旱脅迫處理，分析轉(zhuǎn)基因植株和對(duì)照的生理指標(biāo)變化情況，結(jié)果表明：在干旱脅迫處理15d后，6個(gè)黃麻子轉(zhuǎn)基因植株的相對(duì)含水量與對(duì)照相比差異明顯，對(duì)照植株輔氨酸含量提高了80.20％，而轉(zhuǎn)基因植株葉片脯氨