農(nóng)桿菌介導(dǎo)的TFL1基因轉(zhuǎn)化菊花的研究.pdf

1、菊花是原產(chǎn)我國的十大名花之一，由長(zhǎng)期人工培育和天然種間雜交而來。菊花在葉、花型、瓣型上變化很大，色、香、姿、韻俱佳，與梅蘭竹共稱為“花卉四君子”，不僅為我國人民所喜愛，而且現(xiàn)已為世界各國廣泛栽培。菊花品種繁多，我國多達(dá)3000多種，全世界7000多種，但大多數(shù)品種的自然花期較集中，其自然花期在一定程度上制約著菊花生產(chǎn)的發(fā)展，因此培育菊花的花期多樣性具有十分重要的意義。
　　 TFL1基因?qū)僦参颋T/TFLl(FLOWERING

2、LOCUS T/TERMlNAL FLOWER l）基因家族，TFL1基因抑制花序分生組織向花分生組花織的轉(zhuǎn)變，從而抑制開花使植物花期推后。本研究意在通過對(duì)菊花再生體系及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究，將TFL1基因?qū)氲骄栈ㄖ?，以期獲得花期推后的菊花材料，并為利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良菊花品種的更廣泛運(yùn)用打下基礎(chǔ)。
　　 (1)菊花再生體系的建立及轉(zhuǎn)化受體的篩選以翻銀彩桂、廣東黃、日本紫、麗金、橙黃蓮、雪蓮六個(gè)品種的外植體為試驗(yàn)材料，

3、經(jīng)組織培養(yǎng)獲得無菌苗，再通過對(duì)6個(gè)菊花品種無菌苗幼葉再生的研究，獲得了“廣東黃”幼葉的高頻再生體系，在MS+2.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA的培養(yǎng)基中再生率高達(dá)92％。
　　 (2)建立了以“廣東黃”幼葉為受體的轉(zhuǎn)化體系取5 mm 見方的廣東黃無菌苗葉片，在OD600=0.5的農(nóng)桿菌的MS0 懸浮菌液中震蕩浸染30 min，共培養(yǎng)3 d，在500 mg/L Cef+500 mg/L Carb的MS0 液體培養(yǎng)基中

4、脫菌1-2 h，延遲篩選3 d；在120 mg/L Cef+15 mg/L Kan的分化培養(yǎng)基中分化培養(yǎng)；待芽長(zhǎng)至2 cm 左右，切下接入1/2 MS+15 mg/L Kan中生根。
　　 (3)轉(zhuǎn)化植株的PCR 檢測(cè)和RT-PCR 鑒定對(duì)轉(zhuǎn)化植株一代苗和二代苗的DNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，得到了與陽性對(duì)照TFL1(998bp)目的基因相同的特異片段，篩選得到了5 株陽性植株，初步鑒定了目的基因己經(jīng)整合到菊花基因組中，總轉(zhuǎn)化率為4