農(nóng)桿菌介導DSACO基因轉(zhuǎn)化‘明水’梨的研究.pdf

1、梨是薔薇科（Rosaceae）梨亞料（Romaceae）梨屬（Pyrus）多年生木本植物，是世界主要的果樹作物之一，栽培面積和產(chǎn)量均僅次于蘋果。砂梨（PyruspyrifoliaNakm）原產(chǎn)于我國中部、南部和西部各省，適于在溫暖多雨地區(qū)栽培，是原產(chǎn)于中國的四個梨栽培種之一，具有耐熱、抗旱、抗火疫病等優(yōu)良性狀。但其果實大多貯藏性差，如何提高果實耐貯性是解決好砂梨產(chǎn)業(yè)化的關鍵問題。目前的研究主要是針對砂梨果實的生理特點，通過改善果實的貯藏

2、條件和采用一些乙烯抑制劑來延長砂梨果實的貨架期，不能解決根本問題。本實驗中以‘明水’（PyruspyrifoliaAkemizu）梨為主要試材，通過轉(zhuǎn)基因技術導入DSACO基因，提高該品種的耐儲性，提高其市場競爭力。主要研究內(nèi)容如下：
　　 1、為了將植物表達載體轉(zhuǎn)入模式植物番茄中，本研究初次研究了不同濃度ZT和IAA對‘江疏14號’番茄子葉再生的影響，表明該品種在MS+ZT
　　 1.5mg/L+IAA0.7mg/L的

3、培養(yǎng)基中再生率為81.3％。建立了DSACO和DSLOX基因轉(zhuǎn)化番茄的遺傳轉(zhuǎn)化體系，對獲得的抗性植株進行初步檢測，結果表明上述2個基因的轉(zhuǎn)化效率低，用于轉(zhuǎn)化后抗性植株假陽性率很高。
　　 2、對原有的植物表達載體pYF028-DSACO和pYL028-DSLOX進行改造。將原有DSACO和DSLOX基因經(jīng)PCR驗證后，提取農(nóng)桿菌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，提取大腸桿菌質(zhì)粒，PCR驗證并進行雙酶切，將酶切后的目的片段回收，連接與pY

4、H4215空載體上。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105感受態(tài)。結果表明：pYF028-DSACO改造成功并重新命名為pYH4215-ACOi。
　　 3、ACOi基因轉(zhuǎn)化番茄‘江蘇14號’，實驗中對不同篩選壓濃度進行了梯度實驗，確定潮霉素濃度。對抑菌素的種類和濃度進行選擇，確定抑制超強活性農(nóng)桿菌EHA105的方法，最終調(diào)整了適合ACOi基因轉(zhuǎn)化番茄的遺傳轉(zhuǎn)化體系。獲得12個抗性株系，通過GUS染色、PCR和PT-PCR檢測，得到了3

5、個轉(zhuǎn)基因植株。結果表明：ACOi用于番茄的轉(zhuǎn)化效率要高于DSACO。
　　 4、以‘明水’梨枝條為外植體，研究了無菌苗的獲得，無菌苗的繼代培養(yǎng)和增殖培養(yǎng)。以無菌苗的葉片為外植體，研究不同基本培養(yǎng)基，不同細胞分裂素和生長素組合等再生影響因素對葉片不定芽再生的影響。實驗表明：以在NN69+TDZ1.5mg/L+IBA0.2mg/L+AgNO31.0mg/L，暗培養(yǎng)25d，葉片不定芽再生率最高為71.8％。
　　 5、研究了不