農(nóng)桿菌介導(dǎo)EMDH基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的研究.pdf

1、紫花苜蓿是一種優(yōu)質(zhì)的豆科牧草。它喜溫暖、半濕潤半干旱的氣候，主要在我國黃河流域和西北地區(qū)種植。我國南方地區(qū)酸性土壤等環(huán)境，限制了紫花苜蓿的生長。在酸性土壤中，鋁毒是影響苜蓿生長的最重要的限制因子。因而提高紫花苜蓿對鋁毒的耐受性是解決紫花苜蓿順利引種到我國南方的關(guān)鍵之一。近年來，隨著人們對植物耐鋁機(jī)理的研究，分子生物技術(shù)的發(fā)展，特別是人們發(fā)現(xiàn)有機(jī)酸在植物抵御鋁毒機(jī)制中發(fā)揮著極其重要的作用，為人們可以通過分子手段使苜蓿體內(nèi)控制有機(jī)酸合成的相

2、關(guān)酶過量表達(dá)，提高紫花苜蓿對鋁毒的耐受性奠定了基礎(chǔ)。本研究通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法將來源于大腸桿菌的光誘導(dǎo)型蘋果酸脫氫酶基因?qū)胱匣ㄜ俎Ｖ校鰪?qiáng)紫花苜蓿蘋果酸的合成和分泌，達(dá)到解鋁毒的作用。其主要研究結(jié)果如下： 確定篩選抗生素及脫菌抗生素的濃度。通過篩選實(shí)驗(yàn)，確定潮霉素的篩選方案為前期篩選，在愈傷組織誘導(dǎo)和分化階段篩選濃度以5mg/L為宜。結(jié)合抑菌實(shí)驗(yàn)，確定了在脫菌培養(yǎng)時(shí)愈傷組織誘導(dǎo)和分化階段Car濃度以500mg/L為宜。

3、 獲得了轉(zhuǎn)基因植株。對所獲得的29株抗性植株進(jìn)行PCR檢測，其中1株為轉(zhuǎn)基因陽性植株，經(jīng)RT-PCR檢測驗(yàn)證了蘋果酸脫氫酶(MDH)基因在轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了表達(dá)。 經(jīng)酶活性分析，轉(zhuǎn)基因植株的MDH活性較對照植株提高了16％。 在沒有鋁脅迫的情況下轉(zhuǎn)基因植株葉片中蘋果酸的含量比對照植株提高了1.6倍：在50μmol/L鋁離子脅迫下轉(zhuǎn)基因植株葉片中蘋果酸含量是對照植株葉片含量的3.4倍。 通過根尖耐鋁性測定及根系伸長試