根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Bt和PTA基因轉(zhuǎn)化紫花苜?！爸熊僖惶?hào)”的初步研究.pdf

1、紫花苜蓿是栽培利用最廣泛的豆科牧草，全球種植面積約3500萬(wàn)hm2。苜蓿的大面積種植，也為苜蓿蟲害的發(fā)生和流行創(chuàng)造了有利的生態(tài)條件，近兩年來(lái)蟲害問題日益突出，己成為制約苜蓿產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的主要因素之一。隨著生物技術(shù)的發(fā)展和廣泛應(yīng)用，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良苜蓿的性狀已成為可行的手段。 實(shí)驗(yàn)選取由本研究室通過常規(guī)大田育種技術(shù)育成的紫花苜蓿品種“中苜一號(hào)”作為基因轉(zhuǎn)化受體，首先，以該品種為對(duì)象，選用下胚軸和子葉為外植體，進(jìn)行組織培養(yǎng)系統(tǒng)學(xué)研究

2、，尋找具有相對(duì)較高分化率的外植體和適用于該品種的基本培養(yǎng)基等條件；其次，對(duì)“中苜一號(hào)”進(jìn)行了抗生素(ppt)的敏感性實(shí)驗(yàn)，并具體探討了轉(zhuǎn)化過程中，菌液濃度(OD600)，侵染時(shí)間，共培養(yǎng)時(shí)間等影響轉(zhuǎn)化效率的環(huán)節(jié)。摸索出轉(zhuǎn)化最佳條件為：以“中苜一號(hào)”子葉作為外植體，UM為基本培養(yǎng)基，以O(shè)D600為0.6的菌液侵染10分鐘，轉(zhuǎn)到加蓋有一層滅菌濾紙的培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3天后轉(zhuǎn)到篩選培養(yǎng)基上篩選，篩選培養(yǎng)基附加ppt8mg/l及Carb400mg/