根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)AtPCS1基因轉(zhuǎn)化甘肅紫花苜蓿的研究.pdf

1、利用植物修復(fù)重金屬污染的土壤是一種“綠色”低成本的環(huán)境修復(fù)手段。本實(shí)驗(yàn)通過遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)將重金屬螫合肽合成酶基因AtPCS1轉(zhuǎn)入生物量大、適應(yīng)性強(qiáng)的紫花苜蓿中，以期獲得能富集重金屬的轉(zhuǎn)基因植株，為今后的污染土壤修復(fù)工作提供基礎(chǔ)材料。
　　 首先，研究了隴東、甘農(nóng)三號、甘農(nóng)一號等九個(gè)基因型的紫花苜蓿的子葉、真葉和胚軸在不同培養(yǎng)基上的愈傷組織形成及分化能力。結(jié)果表明：子葉的再生能力強(qiáng)于葉片和胚軸；隴東和甘農(nóng)一號兩個(gè)品種分化能力最強(qiáng)，其

2、子葉愈傷組織的形成率分別為95.0％和94.0％，分化率均為45.0％；F培養(yǎng)基和G培養(yǎng)基是子葉和胚軸愈傷組織形成及分化的最佳培養(yǎng)基。進(jìn)一步比較了隴東、甘農(nóng)三號和甘農(nóng)一號的真葉、胚軸、子葉、莖段不同外的植體的分化再生能力，莖段在G培養(yǎng)基上可以直接分化出苗，子葉較胚軸和葉片分化時(shí)間短，且叢生芽形成數(shù)量多。再生芽可在原培養(yǎng)基上直接分化出苗，并在蔗糖濃度為12.5g/L的1/2MS培養(yǎng)基上完成生根。
　　 其次，用植物表達(dá)載體pBI1

3、21-AtPCS1轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404和EHA105，經(jīng)菌落PCR鑒定獲得陽性菌，采用葉盤法對隴東和甘農(nóng)一號兩個(gè)品種不同類型的外植體遺傳轉(zhuǎn)化，通過GUS組織化學(xué)染色及對抗性愈傷的形成率分析，結(jié)果表明：子葉是適合轉(zhuǎn)化的最佳外植體；隴東和甘農(nóng)一號苜蓿子葉的轉(zhuǎn)化效率無顯著差異。轉(zhuǎn)化后的外植體在含有卡那霉素和頭孢霉素的F培養(yǎng)基上分化芽，在1/2MS培養(yǎng)基上順利完成生根。
　　 取部分轉(zhuǎn)基因苗的葉片進(jìn)行GUS染色和PCR鑒定，結(jié)果表明