農(nóng)桿菌介導的紫花苜蓿懸浮胚性愈傷遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及nodMDH基因的導入.pdf

1、鋁毒害是酸性土壤上限制植物生長發(fā)育的主要因素之一.全世界有39.5億hm<'2>酸性土壤,其中可耕土壤面積為1.79億hm<'2>,如何解決酸性土壤的鋁害問題已經(jīng)是不容忽視的一項重要課題.紫花苜蓿是重要的豆科牧草,在世界上享有"牧草之王"的美譽,種植面積大,應用廣泛.生物技術(shù)的發(fā)展為耐鋁苜蓿新品種的開發(fā)開辟了一條新的途徑.該實驗建立了一套完整實用的苜蓿轉(zhuǎn)化新體系,并將nodMDH基因?qū)氲奖６ㄜ俎Ｖ?為利用生物技術(shù)改良苜蓿品質(zhì)搭建了基礎(chǔ)

2、平臺,并對nodMDH基因的耐鋁效果做了初步的分析.主要的實驗結(jié)果如下:1、建立了保定苜蓿的農(nóng)桿菌介導懸浮胚性愈傷遺傳轉(zhuǎn)化體系.利用二次再生分離得到高頻體胚雨生系;利用110~120rpm在液體UM中懸浮胚性愈傷,得到大量均一的對農(nóng)桿菌敏感的胚性細胞;利用該感受態(tài)胚性細胞為轉(zhuǎn)化受體,避過葉盤轉(zhuǎn)化中農(nóng)桿菌侵染和抗生素篩選對外植體胚性能力的傷害;確定了最佳共培養(yǎng)基濃度(1/4UM)、最適pH值(5.3)以及共培養(yǎng)時間(3d);對乙酰丁香酮的

3、使用量做了摸索,確定了最佳使用量為100μmol/L;鑒別了各種畸形抗性體胚和次生胚的成苗能力,生于胚根和胚軸上易于分散的次生胚最容易成苗.2、利用該體系將nodMDH基因?qū)胲俎Ｔ耘嗥贩N-保定苜蓿中.轉(zhuǎn)基因苗在外部形態(tài)上和對照并無明顯差異.根相對生長量實驗證明轉(zhuǎn)基因植株具有一定的鋁耐受性,在20μmol/L的Al3+濃度下比對照具有更高的根相對生長量.鋁溶液長期處理的根系外部形態(tài)具有較大差異,從根尖、根中部和根莖交接處做了比較,發(fā)現(xiàn)對