農(nóng)桿菌介導的耐鹽基因EhHOG對大麥幼胚及其愈傷組織的遺傳轉化.pdf

1、大麥(Hordeum vulgare L.)是世界上僅次于小麥、水稻和玉米的禾本科作物，具有較高的營養(yǎng)價值和重要的應用價值在世界范圍類廣泛種植，是分子育種的重要模式作物之一。近年來，育種家們開始利用基因工程手段培育抗逆高產(chǎn)優(yōu)質大麥品種。隨著全球生態(tài)環(huán)境的破壞，大面積鹽堿地嚴重阻礙大麥的正常生長繁殖。源于以色列死海絲狀真菌E.herbariorum的EhHOG為編碼絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)的基因，對鹽害有很強的耐性。本研究構建了高效

2、表達的耐鹽基因HOG載體，并用農(nóng)桿菌介導的方式，對3個大麥品種幼胚和愈傷組織的遺傳轉化情況進行了研究，主要結果如下:
　　(1)以大麥品種Golden promise、華大麥4號和華大麥7號的幼胚為實驗材料，分別研究了蔗糖和麥芽糖作糖源對大麥幼胚向愈傷組織誘導及分化的影響，結果表明，麥芽糖和蔗糖都可以作為大麥幼胚誘導和分化培養(yǎng)基的糖源，但麥芽糖誘導率和分化率稍稍高一點。同時研究表明，1g/l的酸水解酪蛋白對大麥愈傷組織誘導有一定促

3、進作用。
　　(2)表達載體以pCAMBIA1300為基本骨架，加入pUbi啟動子和tNos終止子命名為pCAMBIA13001;通過PCR在HOG基因兩端引入酶切位點Bam HI和Sac I，擴增后與pMD-18T載體連接;分別回收雙酶切后的HOG片段和pCAMBIA13001載體片段，并用T4連接酶連接，得到含有目的基因的重組質粒pCAMBIA13001-B;利用電擊法將其導入農(nóng)桿菌AGL1中，為進一步遺傳轉化研究奠定基礎。<