根癌農桿菌介導FPF1基因轉化菊花的研究.pdf

1、該研究旨在通過對菊花再生體系及農桿菌介導的遺傳轉化體系的研究,將FPF1基因導入到菊花中,以期獲得花期提前的菊花新材料,并為利用轉基因技術改良菊花品種的廣泛運用打下基礎.主要工作和結果如下:1.高頻再生體系的研究通過對5個菊花品種幼葉再生的研究,獲得了"黃秀芳"以幼葉為外植體的高頻再生體系,在以MS+1.0mg/L BA+0.1mg/L NAA的分化培養(yǎng)基中再生率可高達94％.在1/2MS培養(yǎng)基中添加0.05mg/L NAA可使再生芽出

2、根快、整齊、根粗壯.2.建立了以"黃秀芳"幼葉為受體的轉化體系通過對外植體的Cef脫菌濃度、KM篩選濃度以及影響轉化頻率因素的研究,獲得了根癌農桿菌介導的"黃秀芳"幼葉轉化體系:葉盤在OD<,600>=0.5的根癌農桿菌菌液中浸染30min、45min共培養(yǎng)2~4d、延遲篩選3d;以100mg/L Cef為脫菌濃度,15mg/L KM為葉盤分化抗性篩選濃度,10mg/LKM為生根抗性篩選濃度.3.根癌農桿菌介導FPF1基因轉化菊花及轉基

3、因植株的田間鑒定獲得了一批FPF1基因的轉基因植株,平均轉化率為2.75％.通過轉基因植株園藝性狀的田間觀察,與對照相比,部分植株開花期明顯提前,且其它園藝性狀也發(fā)生了很大改變.主要表現(xiàn)在:植株變矮、葉片變小、葉色加深、分枝節(jié)位降低等,初步證明外源FPF1基因已在轉基因植株中進行了表達.4.轉基因植株的PCR檢測對轉基因植株的DNA進行PCR擴增,得到了與陽性對照FPF1(330bp)目的基因相同的特異性片段,從分子水平上證明目的基因已