根癌農(nóng)桿菌介導雄性不育基因(barnase)轉(zhuǎn)化苧麻研究.pdf

1、苧麻（Boehmeria nivea（L．）Gaud）是我國重要的韌皮纖維作物之一，栽培和加工歷史悠久，但苧麻的基因工程研究尚處在起步階段。本研究以苧麻品種（品系）“5041-3”、“華苧4號”、“華苧5號”為材料，系統(tǒng)研究了不同培養(yǎng)基對不同外植體再生的影響、選擇劑basra和卡那霉素（Km）對不同外植體再生的抑制效應、不同因素對遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響，并利用建立的遺傳轉(zhuǎn)化體系進行了雄性不育基因（barnase）的轉(zhuǎn)化研究，為遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)在

2、苧麻上廣泛運用提供研究基礎。主要研究結(jié)果如下：
　　 （1）通過對MS、MSB（MS無機鹽成分附加B5有機成分）培養(yǎng)基與生長素吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）的配比實驗，進一步確定了生長素IAA適合子葉的再生，而NAA適合葉片的再生；MS和MSB培養(yǎng)基的選擇則需要視不同基因型而定。
　　 （2）確定了basta用作抗生素選擇劑抑制苧麻外植體再生的適宜選擇壓。0.5～0.7 mg/L的basta已經(jīng)能夠有效抑制苧麻外植

3、體的再生，具體濃度應該參照外植體的生理狀態(tài)作適當調(diào)整。
　　 （3）進一步確定了選擇葉片作為轉(zhuǎn)化體，Km作為抗生素進行選擇時的濃度最低應達到25 mg/L，基因型與外植體的生理狀態(tài)都會對Km的適宜濃度有所影響。故選擇不同外植體作為轉(zhuǎn)化體前，對抗生素的適宜濃度進行篩選，將會提高轉(zhuǎn)基因植株的陽性率。
　　 （4）利用GFP作為報告基因，對根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化苧麻葉片的三個參數(shù)優(yōu)化研究進行了初探，結(jié)果表明共培養(yǎng)時間大于24 h、乙酰