花粉管通道介導(dǎo)轉(zhuǎn)cbf1基因蝴蝶蘭遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建.pdf

1、蝴蝶蘭(Phalaenopsis ssp.)素有“蘭花王后”的美譽(yù)，為熱帶蘭珍品，具有極高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在世界花卉產(chǎn)業(yè)中占有重要的地位?，F(xiàn)階段蝴蝶蘭的育種主要以雜交為主，但育種周期漫長，世代選擇復(fù)雜。因此進(jìn)行花粉管通道法介導(dǎo)的蝴蝶蘭轉(zhuǎn)基因研究，為創(chuàng)造特異性優(yōu)異新種質(zhì)開辟途徑。本文較系統(tǒng)地開展了花粉管通道法介導(dǎo)轉(zhuǎn) cbf1抗寒性基因蝴蝶蘭研究，主要研究結(jié)果如下：
　　(1)對蝴蝶蘭花粉活力與柱頭可授性研究表明，花粉母細(xì)胞減數(shù)

2、分裂進(jìn)程與其它植物有一定差別，其生殖發(fā)育過程較為特殊，雄配子發(fā)育完成于花蕾期，開花后的蝴蝶蘭花粉母細(xì)胞已進(jìn)入明顯的四分體時期，生殖細(xì)胞與營養(yǎng)核均已形成，花粉活力率（染色率）大小為：完全開放1d<花蕾期<花蕾展開期，在花蕾展開期的花粉?；钚宰顝?qiáng)，之后隨時間的增加，活性逐漸降低；柱頭可授性測定顯示，蝴蝶蘭完全開花10d～30d內(nèi)柱頭保持較高的活性，在10d～15d內(nèi)具有較高的可授性。取花蕾展開期的花粉對完全開花10d～15d的柱頭授粉，可獲

3、得較高的雜交成功率。
　　(2)對蝴蝶蘭花粉管通道介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)進(jìn)行了研究，蝴蝶蘭種胚非共生萌發(fā)形成原球莖的最適培養(yǎng)基為Hyponex(3g/L)+瓊脂7.5g/L+香蕉泥100g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨1.5g/L+活性碳2.0g/L；原球莖增殖培養(yǎng)基為Hyponex(3g/L)+瓊脂7.5g/L+香蕉泥100g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨2.0g/L+NAA1.0mg/L+6-BA10.0mg/L；由原球莖實(shí)現(xiàn)植株

4、再生的最適培養(yǎng)基為1/2MS+瓊脂7.0g/L+香蕉泥100g/L+蛋白胨2.0g/L+活性碳2.0g/L+蔗糖25g/L?？股孛舾行栽囼?yàn)表明，蝴蝶蘭原球莖及再生植株在卡那霉素選擇壓為0～200mg/L時，抑制生長不明顯，在300～400mg/L處理組中，生長明顯受到抑制，當(dāng)達(dá)到500mg/L及更高濃度時，存活率為0％?？纱_定500mg/L的Kan為轉(zhuǎn)化株陽性植株篩選的選擇壓力。
　　(3)以攜帶目的基因cbf1的pBI121質(zhì)