蝴蝶蘭、文心蘭再生體系的建立及遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步研究.pdf

1、本試驗(yàn)主要以蝴蝶蘭、文心蘭作為材料，建立了蝴蝶蘭、文心蘭的高頻再生體系，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的GUS基因的轉(zhuǎn)化，利用共培養(yǎng)后組織化學(xué)染色法分析探討了影響轉(zhuǎn)化效率的各種因素，初步優(yōu)化了遺傳轉(zhuǎn)化體系。主要結(jié)果如下： 1．蝴蝶蘭幼嫩花梗原球莖狀體誘導(dǎo)率較高，培養(yǎng)基MS+6-BA 5.0mg/L+NAA 0.5 mg/L誘導(dǎo)率最高，達(dá)100％；原球莖增殖的最佳培養(yǎng)基MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+TD

2、Z 0.2 mg/L，增殖系數(shù)達(dá)2.3；原球莖塊在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)有群體優(yōu)勢(shì)效應(yīng)，切塊3.0 mm時(shí)增殖系數(shù)最大；添加6-BA和NAA的1/2 MS有利于生根，平均根數(shù)達(dá)到3.2條；室內(nèi)煉苗3 d+室外煉苗3 d有利于移栽，移栽成活率達(dá)90.0％。 2．以文心蘭花梗為材料，在NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.2 mg/L+TDZ 0.3mg/L的培養(yǎng)基上，愈傷組織誘導(dǎo)率最高，可達(dá)78％，誘導(dǎo)率受[NAA]/[6-BA]的濃度比和光

3、照強(qiáng)度的影響；在6-BA 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L的激素組合下，從愈傷組織分化出幼苗的形成率和商品化率可達(dá)到最佳效果；中、低無(wú)機(jī)鹽濃度且全量的基本培養(yǎng)基較利于幼苗分化；當(dāng)分化形成的幼苗株高為1-2 cm時(shí)，可進(jìn)一步壯苗生根，生根苗在適宜條件下移栽，成活率可達(dá)99％以上。 3．以蝴蝶蘭原球莖為外植體進(jìn)行農(nóng)桿菌介導(dǎo)，優(yōu)化的轉(zhuǎn)化條件為預(yù)培養(yǎng)時(shí)間3d，菌液侵染濃度OD<,600>=0.3，菌液侵染時(shí)間10 min，p