黃瓜離體再生和遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf

1、黃瓜是一類重要的蔬菜作物，在世界上被廣泛栽培。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)已成為許多作物品種改良的重要手段?？墒?，在黃瓜上無(wú)論是組培技術(shù)還是遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)都不夠成熟，影響了這些技術(shù)在黃瓜育種中的應(yīng)用。Bi基因是控制黃瓜苦味性狀的顯性基因。黃瓜苦味會(huì)嚴(yán)重影響黃瓜的口感，是黃瓜育種中需要改良的性狀。本研究以歐洲溫室型黃瓜G8、川白1792、9930、版納黃瓜為試材，建立了各自適合的再生體系。在此基礎(chǔ)上，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將苦味基因Bi

2、導(dǎo)入黃瓜中，獲得轉(zhuǎn)Bi基因黃瓜植株。主要結(jié)果如下:
　　 1.以子葉塊為外植體建立了適合不同基因型黃瓜的離體再生體系。不同品種對(duì)培養(yǎng)基的要求存在差異，其中G8的最適出芽培養(yǎng)基配方為MS+1.5mg/l6-BA+0.5mg/l ABA+2.0mg/l AgNO3，每外植體平均再生芽數(shù)為4.6個(gè);川白1792和9930的最適培養(yǎng)基配方為MS+2.0mg/l6-BA+1.0mg/l ABA+2.0mg/lAgNO3，每外植體平均再生芽

3、數(shù)分別為6.5個(gè)和5.1個(gè);版納黃瓜的最適出芽培養(yǎng)基配方為MS+1.0mg/l6-BA+0.5mg/l ABA+2.0mg/l AgNO3，每外植體平均再生芽數(shù)為3.7個(gè)。
　　 2.遺傳轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)Bi基因植株再生。優(yōu)化了歐洲溫室型黃瓜G8的遺傳轉(zhuǎn)化體系，結(jié)果表明，侵染時(shí)間為15 min，AS濃度為20 uM，是適合的轉(zhuǎn)化條件。獲得了PCR鑒定10株Bi轉(zhuǎn)基因黃瓜植株，對(duì)其中3株進(jìn)行了熒光定量PCR以及葉子中葫蘆素C液相色譜的分析