蜻蜓鳳梨和鐵蘭植株再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf

1、觀賞鳳梨品種繁多，不少種類具有較高的觀賞價(jià)值，是一類非常惹人喜愛(ài)的新穎花卉，有很好的發(fā)展前景。但目前國(guó)內(nèi)外觀賞鳳梨的轉(zhuǎn)基因育種仍處于起步階段，轉(zhuǎn)基因方面的研究仍為空白。因此，有必要盡快建立起觀賞鳳梨的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系。 本研究以蜻蜓鳳梨和鐵蘭兩種觀賞鳳梨為材料，系統(tǒng)的研究了其植株再生和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。研究結(jié)果如下： (1)利用不同種類不同濃度激素配比的培養(yǎng)基，對(duì)鐵蘭無(wú)菌苗短縮莖進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)，獲得較為適宜

2、愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為：MS+2，4-D2.0mg/L+IBA0.2mg/L+6-BA2.0mg/L，誘導(dǎo)率達(dá)75％，經(jīng)組織學(xué)觀察表明為胚性愈傷組織，且胚性愈傷組織質(zhì)量較好。將胚性愈傷組織接種于MS+NAA0.2mg/L+ABA0.2mg/L的培養(yǎng)基上，分化率高達(dá)81.5％。生根培養(yǎng)基以MS+IBA1.25mg/L+LAA0.8mg/L為好，生根率高達(dá)92.7％。 (2)建立了以蜻蜓鳳梨無(wú)菌苗葉片為外植體直接誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽獲得完

3、整植株的再生體系。最適培養(yǎng)基為MS+6-BA5.0mg/L+NAA2.0mg/L，葉片基部的葉段分化率高達(dá)83.3％；生根培養(yǎng)基以MS+NAA0.5mg/L為好，生根率達(dá)100％，且根較粗壯。 (3)篩選出鐵蘭胚性愈傷組織和蜻蜓鳳梨無(wú)菌苗葉片的Km基礎(chǔ)抗性濃度分別為90mg/L和600mg/L。 (4)鐵蘭胚性愈傷組織預(yù)培養(yǎng)10d后進(jìn)行轉(zhuǎn)化，在OD600≈0.6農(nóng)桿菌菌液中侵染30min，共培養(yǎng)2d，GUS瞬時(shí)表達(dá)最佳，