玉米莖尖再生轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf

1、T h e C o n s t r u c t i o no f T r a n s g e n i c R e g e n e r a t i o nS y s t e m f r o mS t e m T i p o f M a i z e ( Z e aM a y s L 1A D i s s e r t a t i o nS u b m i t t e d t ot h eG r a d u a t e S c h o o l

2、o f H e n a n N o r m a lU n i v e r s i t yi nP a r t i a l F u l f i l l m e n t o f t h eR e q u i r e m e n t sf o rt h eD e g r e eo f M a s t e r o f S c i e n c eB yZ h a n g Y o n g h u iS u p e r v i s o r ：P r

3、o f ．S h a oQ i a n gD a t eM a y , 2 0 1 2摘要迄今為止，組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成為玉米轉(zhuǎn)基因遺傳育種的重要方法。轉(zhuǎn)基因育種的成功首先需要的是一個(gè)成功高效的再生轉(zhuǎn)化體系，本實(shí)驗(yàn)致力于建立一個(gè)完善的玉米莖尖再生轉(zhuǎn)化體系，并取得了成功。目前幼胚仍然是玉米轉(zhuǎn)基因育種的首選材料，但幼胚的取材受時(shí)節(jié)和數(shù)量的限制，而莖尖分生組織與之相比在這些方面上則更有優(yōu)勢(shì)。這就為選用玉米莖尖分生組織作為外植體，建立再生轉(zhuǎn)化體系

4、提供了可能，但是莖尖分生組織受到嚴(yán)格的基因型限制，是比較難于誘導(dǎo)出愈傷組織并再生出植株的外植體。因此，本研究首要的工作是從眾多的基因型中選出再生能力較強(qiáng)的材料，再由這些材料建立高效的再生轉(zhuǎn)化體系，經(jīng)過(guò)了大量的篩選工作和團(tuán)隊(duì)的努力工作，現(xiàn)將取得的研究結(jié)果匯報(bào)如下：1 、篩選T 3 1 個(gè)基因型的玉米莖尖分生組織。在篩選的過(guò)程中，根據(jù)各個(gè)階段受試材料的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，包括誘導(dǎo)愈傷、繼代培養(yǎng)和分化再生的性狀表現(xiàn)．將這些材料進(jìn)行分組，并成功地篩選出了

5、李遼寧、[ R F 3 1 5 、M z l 7 和H I 一Ⅱ4 個(gè)適臺(tái)莖尖分生組織再生的基因型，在這4 個(gè)基因型中，以雜交種H I ．I l 的胚性愈傷誘導(dǎo)效率最高，達(dá)N T S 0 鞋％，其余的三個(gè)自交系品種也都分別達(dá)到了較為理想的2 7 0 3 ％、4 2 9 7 ％和6 38 3 ％。2 、證實(shí)了由莖尖誘導(dǎo)的胚性愈傷組織同樣也可以在培養(yǎng)幼胚的繼代培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，迅速增嫡，突破了莖尖培養(yǎng)與幼胚培養(yǎng)在培養(yǎng)基上的限制，減少了人力和

6、原料的浪費(fèi)。將這些莖尖來(lái)源的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)移到添加有3 m g ／L6 - B ^ 的幼胚的分化培養(yǎng)基上后，均獲得了較高的再生效率，分別達(dá)到7 9 1 ，5 ％、9 29 ％、7 5 ％和9 6 ．6 ％，其中仍以H I ．1 I 的再生率最高，也進(jìn)一步的證實(shí)了雜交品種在玉米組織培養(yǎng)中的優(yōu)越性。3 、在建立莖尖分生組織再生轉(zhuǎn)化體系的過(guò)程中，詳細(xì)地觀察分析了各個(gè)階段愈傷組織的切片結(jié)果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，整個(gè)過(guò)程中愈傷的形成需要經(jīng)歷初級(jí)愈傷組織、次