玉米莖尖分生組織叢生芽高頻誘導(dǎo)和再生體系建立.pdf

1、玉米是世界三大糧食作物之一，轉(zhuǎn)基因是提高玉米產(chǎn)量和品質(zhì)的有效方法。成功的轉(zhuǎn)基因體系依賴于良好的受體系統(tǒng)。目前，幼胚仍然是玉米轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)中最重要的外植體。而由成熟胚莖尖分生組織誘導(dǎo)而來的叢生芽與傳統(tǒng)的幼胚相比，具有不受季節(jié)限制，誘導(dǎo)率高，再生植株無變異等優(yōu)勢。如何高頻的誘導(dǎo)叢生芽并再生成為完整植株正是本課題的研究目的所在。本研究主要獲得的結(jié)果有以下幾點：
　　 1、以CML295莖尖分生組織為受體材料，根據(jù)實驗所得濃度范圍分別配

2、制8種含有不同濃度6-BA和2，4-D的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)，每種培養(yǎng)基包含3次重復(fù)試驗，并最終以誘導(dǎo)頻率的高低作為評價標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行極差分析，誘導(dǎo)頻率最高達(dá)到63%。
　　 2、以3.5:0.5和3.0:0.5兩種誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的叢生芽為對象，研究叢生芽的繼代和擴繁能力。3.5:0.5誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的叢生芽能繼代培養(yǎng)6個月左右，后期擴繁能力較差：3.0:0.5誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的叢生芽可以繼代12個月左右，后期仍具有一定的擴繁能力；而在3

3、.5:0.5誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)并在3.0:0.5誘導(dǎo)培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)的叢生芽在繼代16個月后仍有較好的生長狀態(tài)和較高的增殖能力。
　　 3、通過對各誘導(dǎo)培養(yǎng)基上所誘導(dǎo)出叢生芽的質(zhì)量進(jìn)行對比分析，建立叢生芽質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)。將誘導(dǎo)頻率，增殖速度和誘導(dǎo)質(zhì)量等因素相結(jié)合，得到6-BA濃度為3.2mg/L，2，4-D濃度為0.5mg/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基最為適宜
　　 4、用不同生長時期的叢生芽制作樣品進(jìn)行掃描電鏡觀察。觀察到誘導(dǎo)前、中、后