黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)選用S06和S52兩個黃瓜品系，以子葉和子葉節(jié)兩種不同外植體作為轉(zhuǎn)化受體，利用根癌農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，同時對預(yù)培養(yǎng)時間、共培養(yǎng)時間和抗生素敏感程度三個影響遺傳轉(zhuǎn)化的因素進(jìn)行了研究。 S05、S06子葉誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基分別為：MS+BA 3.0 mg.L-1+ABA 1.0 mg.L-1+AgNO3 2.0 mg.L-1 和MS+BA 1.5 mg.L-1+ABA 0.5 mg.L-1+AgNO3 2.0

2、mg.L-1。S06子葉節(jié)的芽啟動培養(yǎng)基為：MS+BA 1.5 mg.L-1+IAA 0.2 mg.L-1，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+BA 0.5 mg.L-1+IAA 0.02 mg.L-1。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：S06和S52子葉轉(zhuǎn)化體系，預(yù)培養(yǎng)時間均為1 d，共培養(yǎng)時間均為4-6 d。 在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)階段， S06子葉Kan的最適臨界濃度為140 mg.L-1，S52子葉Kan的最適臨界濃度為120 mg.L-1；S06子葉節(jié)

3、Kan的最適臨界濃度也為140 mg.L-1。無論不同的外植體類型還是不同的黃瓜品系，其再生出的芽在伸長和生根階段，對Kan的最適臨界濃度均為100 mg.L-1。由于S52本身是長勢較弱的品系，所以在伸長和生根階段其長勢遠(yuǎn)不如S06，很多表現(xiàn)為簇生和早開花。 以S06子葉為轉(zhuǎn)化受體，pBI121-ATT1為中間載體的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，409個外植體，經(jīng)選擇培養(yǎng)后，共獲得9個抗性芽，在伸長及生根培養(yǎng)后， 9個抗性芽中有5個完全白化，1

4、個不能伸長，最終3個抗性芽伸長并能生根，即獲得了3株抗性植株，經(jīng)PCR檢測，結(jié)果顯示，均擴(kuò)增出2000bp的目的片段。 以S52子葉為轉(zhuǎn)化受體，pBI121-LUC為中間載體的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，543個外植體，經(jīng)選擇培養(yǎng)后，共獲得82個抗性芽，但是在伸長及生根培養(yǎng)時，大部分很難伸長或生根，最終只獲得14株抗性植株，經(jīng)PCR檢測，結(jié)果顯示，只有1株未擴(kuò)增出目的片段，其余13株均擴(kuò)增出630bp的目的片段。 以S06子葉節(jié)為轉(zhuǎn)化受