劍麻再生體系的構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步研究.pdf

1、劍麻是全球和我國(guó)熱區(qū)最重要的麻類(lèi)經(jīng)濟(jì)作物，其綜合利用前景十分廣闊。劍麻斑馬紋病和劍麻莖腐病是當(dāng)前我國(guó)劍麻生產(chǎn)上最嚴(yán)重的毀滅性的傳染性病害，可造成植麻區(qū)麻株大量死亡，產(chǎn)量大幅降低。且由于劍麻是多年生植物，生命周期較長(zhǎng)，一般8年以上才能開(kāi)花，再加上我國(guó)目前劍麻育種基礎(chǔ)薄弱，種質(zhì)資源少，給劍麻的雜交育種帶來(lái)了很大困難。因此通過(guò)構(gòu)建劍麻的再生體系，進(jìn)而開(kāi)展抗病基因轉(zhuǎn)化研究，縮短劍麻抗病育種年限，提高育種時(shí)效，培育多抗高產(chǎn)品種，對(duì)促進(jìn)我國(guó)劍麻產(chǎn)業(yè)

2、的穩(wěn)步發(fā)展具有重要的意義。 本文采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，以劍麻幼葉為外植體，進(jìn)行了愈傷組織的誘導(dǎo)試驗(yàn)，并成功的誘導(dǎo)出苗，建立了從愈傷組織到植株的再生體系，并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)初步探索了劍麻遺傳轉(zhuǎn)化的研究，為下一步開(kāi)展抗病基因?qū)?，培育轉(zhuǎn)基因劍麻抗病品種提供基礎(chǔ)。 主要研究結(jié)果如下： 1.幼嫩的劍麻葉片愈傷誘導(dǎo)率較老的葉片高，且誘導(dǎo)出的愈傷分化率高。 2.愈傷組織在N6培養(yǎng)基中比在MS培養(yǎng)基中啟動(dòng)快。幼嫩葉片(葉

3、齡2～3周)在N6培養(yǎng)基上27d即出現(xiàn)白色晶體狀愈傷組織點(diǎn)。 3.對(duì)劍麻葉片在附加不同質(zhì)量濃度配比的NAA、6-BA、2,4-D的N6培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明N6+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L，N6+NAA0.2mg/L+6-BA3.0～4.0mg/L+2,4-D0.5～1.0mg/L對(duì)劍麻葉片愈傷組織誘導(dǎo)效果優(yōu)于其它濃度配比。 4.高濃度的細(xì)胞分裂素6-BA和低濃度的生長(zhǎng)素NAA配合使用能促進(jìn)

4、愈傷誘導(dǎo)出芽，而用TDZ代替6-BA效果更顯著，可以加速出芽的時(shí)間。本研究中誘導(dǎo)愈傷組織出芽的最優(yōu)培養(yǎng)基是MS+NAA0.05mg/L+TDZ1.5mg/L。 5.劍麻不定芽增殖培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基為MS+NAA0.05mg/L+6-BA2.0mg/L，分化不定芽最多，增殖系數(shù)達(dá)4.4，且增殖芽長(zhǎng)得較壯。 6.劍麻生根的最優(yōu)培養(yǎng)基為MS+IAA1.0mg/L，12天左右便能長(zhǎng)出須狀根，生根率達(dá)96％，且根多、較短粗、葉色濃綠