棉花遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建及AtABA2基因的轉(zhuǎn)化.pdf

1、棉花新品種的培育需要優(yōu)良的種質(zhì)資源。利用生物技術(shù)創(chuàng)造棉花種質(zhì)資源是一條非常有效的途徑，可極大地推動(dòng)棉花遺傳育種的發(fā)展。高效的轉(zhuǎn)化方法尤為重要。
　　 實(shí)驗(yàn)通過調(diào)整體細(xì)胞胚胎發(fā)生和農(nóng)桿菌浸染的部分技術(shù)因子，優(yōu)化了棉花植株再生和農(nóng)桿菌浸染體系。研究發(fā)現(xiàn)MSB5培養(yǎng)基添加濃度均為0.1 mg/L的IAA、2,4-D、KT，在pH6.0的條件下可誘導(dǎo)出較好的愈傷組織。采用MSB5培養(yǎng)基與IAA、KT、2,4-D三種激素組合，三周繼代一次

2、。每次繼代，激素濃度比前一次培養(yǎng)基中降低0.01 mg/L直到濃度降至0.05 mg/L，繼代培養(yǎng)2-3次即可誘導(dǎo)愈傷組織分化產(chǎn)生胚性愈傷組織。胚狀體誘導(dǎo)可采用逐步提高培養(yǎng)基pH的方法，在繼代時(shí)添加濃度為0.01 mg/L IAA、6-BA和0.1 g/L的谷氨酰胺，經(jīng)3-4次繼代可誘導(dǎo)產(chǎn)生胚狀體。再生苗采用嫁接的方法進(jìn)行繁殖，存活率可高達(dá)90％以上。
　　 以冀合713下胚軸胚誘導(dǎo)產(chǎn)生的胚性愈傷組織為受體進(jìn)行農(nóng)桿菌侵染，通過開

3、展轉(zhuǎn)化效率影響因素篩選試驗(yàn)。結(jié)果表明，將菌液培養(yǎng)至OD600=0.3侵染3 min，采用26 ℃共培養(yǎng)48 h可達(dá)到最佳轉(zhuǎn)化效率，50 mg/L為卡那霉素最佳篩選濃度。利用此體系已將AtABA2（Arabidopsis thaliana ABA deficient 2）基因轉(zhuǎn)入冀合713中，獲得了轉(zhuǎn)基因棉花植株。
　　 在棉花盛花期通過自交時(shí)間觀察、注射時(shí)間梯度、注射方式實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化了花粉管通道注射法的參數(shù)。研究發(fā)現(xiàn)，在自交后約3