根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及轉(zhuǎn)抗黃萎病基因棉花的獲得.pdf

1、本文主要在前人的研究基礎(chǔ)上,對(duì)以?xún)煞N不同材料作為外植體的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了進(jìn)一步并且較為全面的研究探索,最終建立了兩套比較完善實(shí)用的轉(zhuǎn)化系統(tǒng),并且對(duì)運(yùn)用花粉管通道法對(duì)棉花進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的技術(shù)進(jìn)行了初步的探索。
　　 首先以珂字棉312品種作為材料,利用其下胚軸為外植體,將irrE基因通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入其中。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,對(duì)可能影響遺傳轉(zhuǎn)化結(jié)果的一些因素分別進(jìn)行了研究討論,最終建立了一套比較完善可行的以棉花下胚

2、軸為外植體材料的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　 在外植體生長(zhǎng)的每一個(gè)階段都用一定濃度的卡那霉素進(jìn)行篩選,在經(jīng)過(guò)大約10個(gè)月后,其中萌發(fā)得到的再生苗為48株,出苗率約為1.05％;最后再用低濃度的卡那霉素對(duì)再生小苗進(jìn)行篩選,存活的再生苗約為35株,初步得到的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性率約為72.92％。
　　 其次以中棉所24品種作為材料,利用其胚性愈傷組織為外植體,將irrE基因通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入其中。經(jīng)過(guò)研究探討,最終也建立了一套

3、比較完善可行的以棉花胚性愈傷組織為外植體材料的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　 在經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化的胚性愈傷組織生長(zhǎng)的每一個(gè)階段都用一定濃度的卡那霉素進(jìn)行篩選,在經(jīng)過(guò)大約7個(gè)月后,其中萌發(fā)得到的再生苗為27株,出苗率約為6.92％；最后再用低濃度的卡那霉素對(duì)再生小苗進(jìn)行篩選,存活的再生苗約為18株,初步得到的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性率約為66.67％。
　　 最后運(yùn)用花粉管通道法將GbVe1和GbVe2基因,分別轉(zhuǎn)入中棉所24和冀棉14中。收