樟樹遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化及抗寒基因的轉(zhuǎn)化.pdf

1、樟樹（CinnamomumcamphoraL.）是樟科樟屬的一種高大喬木，分布在中國南部各省。樟樹作用很多，有重要的經(jīng)濟(jì)和材用價值。樟樹喜光，較耐水淹，樹形大，能吸收煙塵、積蓄并保持水源、防沙固土和凈化環(huán)境，是城市綠化中的優(yōu)質(zhì)樹種。雖然香樟在園林綠化中應(yīng)用普遍，但受氣候影響，樟樹應(yīng)用有區(qū)域性差異，由于北方氣溫較低、空氣寒冷，在城市中沒有得到大量推廣。因此，本研究對樟樹的體細(xì)胞胚發(fā)生體系以及遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化，為更好的導(dǎo)入目的基因奠定基

2、礎(chǔ)，同時利用優(yōu)化的轉(zhuǎn)化體系，將抗寒基因AtCBF3和LlDERB1導(dǎo)入樟樹中，以提高樟樹的抗寒性。主要研究結(jié)果如下:
　　1.樟樹體細(xì)胞胚發(fā)生體系的優(yōu)化
　　(1)胚齡對體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)率和平均體細(xì)胞胚數(shù)有顯著的影響:開花后60天、70天、80天的樟樹合子胚體細(xì)胞胚誘導(dǎo)率分別為55.67％、5.92％、0％，平均誘導(dǎo)體細(xì)胞胚數(shù)分別為3.67、1.33、0.00。因此，實驗時選擇開花后60天的最佳。
　　(2)母株基因型對

3、體細(xì)胞胚誘導(dǎo)率有顯著的影響:三棵不同基因型的樟樹合子胚體細(xì)胞胚誘導(dǎo)率分別為55.67％、36.99％和34.33％，誘導(dǎo)的平均體細(xì)胞胚數(shù)分別為3.67、3.33和4。所以，不同母株基因型的體細(xì)胞胚誘導(dǎo)率具有顯著性差異，應(yīng)選取適合的母株進(jìn)行體細(xì)胞胚誘導(dǎo)。
　　(3)合子胚損傷對樟樹體細(xì)胞胚誘導(dǎo)率有顯著的影響:合子胚劃傷、子葉分開、完整合子胚體細(xì)胞胚誘導(dǎo)率分別為21.00％、2.83％和60.33％，因此在樟樹的體細(xì)胞胚誘導(dǎo)中，宜選取

4、完整的樟樹合子胚，實驗時避免損傷未成熟的合子胚。
　　2.樟樹遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化
　　(1)甘露醇預(yù)處理濃度和時間及預(yù)處理方式對樟樹抗性愈傷組織誘導(dǎo)率的影響顯著:0.4mol/L甘露醇處理4h，樟樹抗性愈傷組織的誘導(dǎo)率最高;其他濃度的甘露醇處理不同時間，樟樹的抗性愈傷組織誘導(dǎo)率均較低。0.4mol/L甘露醇固體培養(yǎng)基的抗性愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于0.4mol/L甘露醇的液體培養(yǎng)基。因此，應(yīng)選甘露醇濃度為0.4mol/L的固體培

5、養(yǎng)基處理4h，以保證較高的抗性愈傷組織的誘導(dǎo)率。
　　(2)基因型、受體材料對樟樹的遺傳轉(zhuǎn)化具有影響，實驗時以選取狀態(tài)良好的胚性愈傷組織為宜。
　　(3)農(nóng)桿菌菌株對樟樹的抗性愈傷組織誘導(dǎo)有顯著影響:使用菌株EHA105與LBA4404的抗性愈傷組織誘導(dǎo)率分別為35.33％、24.00％，所以，選擇EHA105對抗性愈傷組織的誘導(dǎo)較好。
　　3.轉(zhuǎn)AtCBF3和LlDREB1的抗性愈傷組織和抗性體胚的獲得
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