蝴蝶蘭組培快繁體系的建立.pdf

1、本試驗以蝴蝶蘭花梗及無菌苗葉片為研究材料，開展了類原球莖誘導、增殖、分化等研究，建立了蝴蝶蘭組培快繁體系，為蝴蝶蘭優(yōu)良種苗的快速生產(chǎn)以及通過以類原球莖和葉盤為受體實現(xiàn)對蝴蝶蘭品質性狀的遺傳改良的蝴蝶蘭轉基因研究奠定基礎。
　　主要研究結果如下:
　　1、蝴蝶蘭花梗無菌培養(yǎng)體系的建立
　　以蝴蝶蘭花梗為試材，研究不同品種的花梗所需0.1％升汞消毒的時間，花梗不同部位及不同培養(yǎng)基對腋芽萌發(fā)的影響。試驗結果表明不同品種的花梗

2、最佳消毒時間不一，可采用消毒時間15min，花梗污染率低，存活率較高;位于花梗中部的花梗腋芽誘導率較高，均達60％以上;促進花梗腋芽萌發(fā)的最適培養(yǎng)基為:MS+6-BA5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+sucrose30g·L-1+AC1g·L-1,Agar7.5g·L-1,pH為5.6。
　　2、蝴蝶蘭PLB誘導體系的建立
　　(1)葉片誘導PLB
　　無菌苗及花梗腋芽萌發(fā)的幼葉生長30d左右，葉長為1～2cm

3、，是誘導PLB效果最佳的材料。葉片切割寬度為0.5cm時，三個品種的蝴蝶蘭PLB誘導效果均最好。
　　由于蝴蝶蘭品種不同，葉片誘導PLB的最佳激素配比存在差異:1474-1與傳1葉片誘導PLB最佳的培養(yǎng)基為:1/2MS+TDZ0.2mg·L-1+6-BA4mg·L-1+CW20％+PVP3g·L-1+sucrose15g·L-1，其PLB誘導率可達50.43％，每個葉片組織塊上誘導出PLB數(shù)目值為12.78個;而3206適合較高濃

4、度的TDZ，葉片誘導PLB最適培養(yǎng)基為:1/2MS+TDZ0.6mg·L-1+6-BA4mg·L-1+CW20％+PVP3g·L-1+Sucrose15g·L-1,Phytagel3g·L-1,pH=5.5。
　　(2)蝴蝶蘭葉片誘導PLB過程中的防褐化
　　10d黑暗預處理后的葉片，褐化率降至為60％，PLB誘導率可達56.67％;添加不同種類和濃度的防褐化劑，均可降低褐化率，添加VC0.4g·L-1效果最好，褐化率降至4

5、7.50％，且PLB的誘導最高;光強1000Lux條件下，PLB褐變率較低，且長勢良好。
　　(3)葉片誘導PLB過程中的組織學觀察
　　本試驗對葉片誘導PLB過程中的各個時期的葉片組織塊進行石蠟切片，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn):蝴蝶蘭體細胞胚胎為單細胞起源，發(fā)生在葉片上表皮細胞或上表皮下方的葉肉細胞，單細胞原胚分裂形成多細胞原胚，后經(jīng)一系列發(fā)育，逐漸脫離母體，最終形成較大顆粒狀的PLB。
　　(4)根尖誘導PLB
　　最適合蝴

6、蝶蘭根尖誘導PLB的培養(yǎng)基為:1/2MS+TDZ0.6m g·L-1+6-BA4m g·L-1+CW20％+PVP3g·L-1+Sucrose15g·L-1,Phytagel3g·L-1,pH=5.5。1474-1的PLB誘導率為4.33％，3206的PLB誘導率為5.93％。
　　3、PLB的增殖、分化及生根培養(yǎng)
　　本試驗中得到最適合蝴蝶蘭PLB增殖的培養(yǎng)基為:VW+ZT5m g·L-1+Ad5m g·L-1+CW20％

7、+PVP3g·L-1+sucrose15g·L-1,Agar7.5g·L-1,pH=5.5。
　　最適合蝴蝶蘭PLB分化培養(yǎng)的培養(yǎng)基為:花寶+ZT3mg·L-1+Ad5mg·L-1+CW20％+PVP3g·L-1+sucrose15g·L-1,Agar7.5g·L-1,pH=5.5。
　　最適合蝴蝶蘭分化苗生根的培養(yǎng)基為:1/2MS+NAA1mg·L-1+TBA1mg·L-1+80g·L-1香蕉+sucrose30g·L-1