棉花植株再生和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Enhancer trap遺傳轉(zhuǎn)化.pdf_第1頁(yè)
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1、本文通過(guò)建立高效棉花遺傳轉(zhuǎn)化體系，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因方法，旨在創(chuàng)建棉花T-DNA插入的Enhancer-trap突變系。主要研究結(jié)果如下： 1.為了提高棉花遺傳轉(zhuǎn)化效率，針對(duì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的一些重要影響因素，如菌株、AS、菌液濃度、共培養(yǎng)時(shí)間等做了一系列分析實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：農(nóng)桿菌濃度0.50D值左右是比較理想的濃度；MGL菌液培養(yǎng)基中加入50mg/L乙酰丁香酮；共培養(yǎng)溫度19℃，暗培養(yǎng)48小時(shí)，能夠獲得較高的轉(zhuǎn)化效率；不同菌

2、株對(duì)棉花品種轉(zhuǎn)化效率不相同，菌株LBA4404較C58C3更加適合于以下胚軸為外植體的棉花遺傳轉(zhuǎn)化。 2.在愈傷繼代過(guò)程中設(shè)置不同的2、4-D和Kinetin濃度組合，發(fā)現(xiàn)隨著2、4-D濃度的降低，愈傷塊發(fā)綠、變硬、不利于愈傷分化成胚性愈傷。 3.通過(guò)體細(xì)胞胚胎發(fā)生與農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法，獲得了轉(zhuǎn)基因棉花YZ1植株。通過(guò)PCR檢測(cè)和Southern雜交及組織化學(xué)染色(GUS染色)證實(shí)了已成功將目的基因片斷轉(zhuǎn)入到棉花基

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