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文檔簡介
1、苜?;ㄋ帒腋∨囵B(yǎng)體系的建立可為苜蓿體細(xì)胞雜交、遺傳轉(zhuǎn)化以及獲得苜蓿單倍體,建立苜蓿加倍單倍體群體(DH)提供快捷有效的途徑。本研究以自選系多葉0501×Sanditi、自選系大葉0510×Sanditi苜蓿雜交F1代的花藥愈傷組織為材料建立懸浮細(xì)胞系,并植株再生。通過探索苜蓿懸浮培養(yǎng)體系建立的基礎(chǔ)條件及其影響因素,建立適宜的苜?;ㄋ帒腋∨囵B(yǎng)體系,為創(chuàng)造苜蓿新種質(zhì)提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
1.不同基因型材料的愈傷組織誘導(dǎo)
2、率差異不大。2,4-D濃度為0.5mg/L時,經(jīng)過5次調(diào)控繼代、最后一次繼代20d左右的淡黃色或乳白色生長快、結(jié)構(gòu)疏松顆粒狀胚性愈傷組織,適宜建立胚性懸浮細(xì)胞系。
2.參試苜蓿品種在NB液體培養(yǎng)基中愈傷組織誘導(dǎo)率較高;同一激素水平下,NB培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于MS液體培養(yǎng)基。接種后,培養(yǎng)液pH值出現(xiàn)下降一上升一平穩(wěn)的趨勢。
3.采用固-液培養(yǎng)基結(jié)合的方式建立苜?;ㄋ帒腋∨囵B(yǎng)體系?;疽后w培養(yǎng)基為NB培養(yǎng)
3、基,培養(yǎng)液最佳組合為NB+2,4-D0.3mg/L+NAA0.3mg/L,蔗糖2%-3%。苜?;ㄋ帒腋〖?xì)胞系繼代周期為6d-8d時,有利于苜蓿胚性懸浮細(xì)胞系的建立與保持。
4.懸浮培養(yǎng)條件下,溫度對懸浮細(xì)胞系有明顯的影響。溫度為30℃時,懸浮細(xì)胞系出現(xiàn)輕微的褐化現(xiàn)象;38℃時,懸浮細(xì)胞褐化現(xiàn)象趨于嚴(yán)重,并出現(xiàn)死亡。溫度為43℃、24h時,懸浮細(xì)胞系半數(shù)死亡。45℃、12h時,懸浮細(xì)胞系全數(shù)死亡。綜合以上可認(rèn)為43℃為苜?;?/p>
4、藥懸浮系半致死溫度,45℃為致死溫度。苜?;ㄋ帒腋∨囵B(yǎng)高溫脅迫的研究可為苜蓿DH群體栽培適應(yīng)范圍的擴(kuò)大提供理論依據(jù)。
5.通過對懸浮培養(yǎng)細(xì)胞系愈傷組織誘導(dǎo)的研究表明,接種15d后出現(xiàn)淡黃色的小米粒狀的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)的愈傷組織。愈傷組織在分化培養(yǎng)基中可產(chǎn)生大量乳白色、膨大的不定芽。在以上兩過程中培養(yǎng)液顏色呈現(xiàn)淺紅棕色-棕紅色-淡紅棕色-米色-乳白色-無色的變化。
6.倍性鑒定情況經(jīng)愈傷組織及根尖染色體計數(shù)法對花培植株
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