綠色粘帚霉代謝產(chǎn)物對(duì)柑橘青綠霉病生物防治的研究.pdf

1、柑橘采后因真菌性病害造成的損失嚴(yán)重，其中以青霉(Penicillium italicum)和綠霉(Penicillium digitatum)為主。國(guó)內(nèi)外主要靠化學(xué)藥劑處理進(jìn)行防治。
　　 本文以具有生防潛能的綠色粘帚霉(Gliocladium virens)為對(duì)象研究其發(fā)酵條件和優(yōu)化組合；對(duì)它的拮抗物質(zhì)粗提取，檢測(cè)這些活性物質(zhì)的生理生化性質(zhì)，測(cè)定它們對(duì)柑橘青綠霉菌的抑菌活性；在此基礎(chǔ)上，與青綠霉孢子懸浮液以及化學(xué)殺菌劑的處理比

2、較防治效果。本研究的主要結(jié)果如下：
　　 1.從柑橘園土壤中分離得到G.virens菌株共32個(gè)。通過(guò)比較它們對(duì)柑橘青霉病、綠霉病的拮抗性發(fā)現(xiàn)，G-3菌株對(duì)柑橘青霉病拮抗性最強(qiáng)；G-4菌株對(duì)柑橘綠霉病拮抗性最強(qiáng)。通過(guò)單因素法對(duì)生防菌G-3、G-4菌株的液體培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明，優(yōu)化培養(yǎng)基配方為3＃液體培養(yǎng)基：菌核粉5g、氯化鈉3g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂(MgSO4.7H2O)3g;同時(shí)，初始pH6、培養(yǎng)溫度25℃～30

3、℃、接種量為菌絲圓片5塊、全黑暗振蕩、搖瓶裝液量50mL/250 mL、培養(yǎng)時(shí)間8d時(shí)G.virens發(fā)酵液的抑制作用最強(qiáng)。
　　 2.對(duì)發(fā)酵液的一些理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，發(fā)酵液具有較高的熱穩(wěn)定性；在酸性、中性環(huán)境下比較穩(wěn)定，堿性環(huán)境下不穩(wěn)定；發(fā)酵液4℃下保存半個(gè)月，幾乎能維持不變的抑菌作用；隨時(shí)間的繼續(xù)增長(zhǎng)，抑制率下降，一個(gè)月后不再有明顯變化；發(fā)酵液抑菌譜測(cè)定表明，對(duì)柑橘青霉病菌(Penicillium italicu

4、m)、綠霉病菌(Penicillium digitatum)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、終極腐霉病菌(Pythimultimum)、葡萄根霉病菌(Rhizopus stolorifer)均有較強(qiáng)的抑制作用，結(jié)果表明其對(duì)土傳病害具有較強(qiáng)的防治潛力；通過(guò)對(duì)發(fā)酵液經(jīng)蛋白酶處理后的抑菌活性測(cè)定表明，其抑制率明顯降低，表明蛋白酶參加了對(duì)病原菌的抑制作用；經(jīng)不同極性有機(jī)溶劑的溶解性檢測(cè)，活性成分易溶于乙酸乙酯

5、、氯仿；通過(guò)顯色反應(yīng)表明，粗提取物呈酸性，其中可能含有酚類和酮類的特征基團(tuán)。
　　 3.應(yīng)用DNS試劑對(duì)代謝產(chǎn)物中纖維素酶及幾丁質(zhì)酶活力的測(cè)定。G-4菌株的纖維素酶活力優(yōu)于其它菌株為80.94U/mL;G-11菌株幾丁質(zhì)酶活力最高為21.47U/mL。這與G-4，G-11菌株發(fā)酵液的抑菌活性強(qiáng)保持一致性，表明其抑菌活性與這兩種酶活力有一定相關(guān)性。
　　 4.本文采用薄層色譜法(TLC)選擇展開(kāi)劑，乙酸乙酯：氯仿(4：6)

6、的Rf(0.31、0.52、0.634、0.753、0.94)，Rf在要求的0.2～0.8之間，有較好分離效果；用硅膠柱層析分離技術(shù)將活性成分從發(fā)酵液中提取分離出來(lái)，發(fā)現(xiàn)有三種主要成分具有較強(qiáng)的抑制活性?；钚猿煞?對(duì)柑橘青、綠霉病的抑制率分別為48.32％、60.83％;活性成分2對(duì)柑橘青、綠霉病的抑制率分別為48.01％、57.35％;活性成分3對(duì)柑橘青、綠霉病的抑制率分別為35.28％、55.79％。
　　 5.與孢子懸浮液

7、以及化學(xué)殺菌劑比較，測(cè)定了提取物水溶液對(duì)柑橘青霉、綠霉病的防治作用。果實(shí)處理5d后，CK的病情指數(shù)55.69％，活性物質(zhì)1的對(duì)柑橘青綠霉病的病情指數(shù)分別是29.87％、22.63％，表明活性物質(zhì)1有較強(qiáng)的防腐作用。柑橘果實(shí)室內(nèi)貯藏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，貯藏30d、60d和90d后，各活性成分對(duì)柑橘青霉、綠霉病的發(fā)生均具有不同程度的抑制作用。柑橘果實(shí)室內(nèi)貯藏90d后，活性物質(zhì)1對(duì)柑橘青綠霉的室內(nèi)防效最好，分別為73.22％、71.66％，略低于當(dāng)