蘿卜霜霉病抗性遺傳標記與Rs-AFPs基因表達分析.pdf

1、蘿卜(Raphanus sativus L.)是起源于中國的一種重要十字花科蔬菜作物，種質資源豐富，栽培歷史悠久，具有較高的食用價值和經(jīng)濟價值。由寄生霜霉(Hyalonosporanparasitica)引起的霜霉病是十字花科作物上的一種世界性病害。近幾年，蘿卜霜霉病發(fā)生嚴重，尤其是春秋季保護地栽培溫度適宜且潮濕的環(huán)境下更易發(fā)生，并且在整個生長期都容易發(fā)生，嚴重影響了蘿卜的產(chǎn)量品質。因此，提高霜霉病抗性成為蘿卜重要育種目標之一。目前十字

2、花科蔬菜霜霉病的研究主要集中在蕓薹屬蔬菜作物上。
　　 本研究在研究室建立蘿卜霜霉病抗性鑒定、抗性生理與遺傳研究基礎上，開展霜霉病抗性分子標記與Rs-AFPs基因表達分析，主要結果如下：⑴以蘿卜抗感材料NAU-dhp08×NAU-qtbjq-06組合的F2分離群體為試材，通過人工接種鑒定，采用混合分離分析法(BSA)，采用高抗單株和高感單株分別構建抗感池，篩選了RAPD、EST-SSR、SRAP、ISSR和RGA引物。篩選了18

3、66個引物或引物組合，通過F2單株驗證，經(jīng)x2測驗后符合孟德爾遺傳定律，遺傳作圖顯示，與蘿卜霜霉病抗性基因緊密連鎖的標記中，遺傳距離小于10cM的有3個，分別是Me7/em10400(7.7 cM)，NAUISSR862700(5.9cM)與Em9/ga24370(2.3 cM)，最近的標記距抗性位點的距離為2.3cM，即Em9/ga24370。研究結果為蘿卜霜霉病抗性標記輔助選擇(Markerassisted selection，MA

4、S)，霜霉病抗性育種與新品種選育工作奠定了基礎。⑵根據(jù)蘿卜中已報道的抗菌肽(Rs-AFPs)基因序列設計引物，以蘿卜‘NAU-dhp08’的葉片為試材，采用PCR法進行擴增，獲得4種Rs-AFPs的基因組DNA，分別命名為Rs-AFP1、Rs-AFP2、Rs-AFP3和Rs-AFP4；獲得的4條Rs-AFPs序列分別與芥菜Bj-AFP1基因(AB537492.1)(98％)、芥菜防御酶基因(DQ191751.1)(93％)、甘藍防御酶基

5、因(EF423802.1)(96％)和大白菜防御酶基因(AF528180.1)(97％)高度同源。采用RT-PCR法獲得Rs-AFP3和Rs-AFP4的cDNA序列，其氨基酸分別與甘藍，甘藍型油菜同源性很高。半定量PCR分析表明，Rs-AFP3基因在接種霜霉病后6h表達量最高；Rs-AFP4基因在接種后有兩次表達高峰，分別是在6h和36h時表達量最高。研究結果對于進一步揭示抗菌肽基因在蘿卜抗霜霉病反應中的作用機制與生物學功能具有重要意義