五指山原始林區(qū)土壤稀有放線菌的初步調(diào)查.pdf

1、五指山位于海南島中部,北緯18°45'20"～18°58'54",東經(jīng)109°39'38"～109°47'50",主峰位于五指山市境內(nèi),最高峰海拔高度1867米,屬國(guó)家自然保護(hù)區(qū)的面積134.4平方公里,為海南最大的自然保護(hù)區(qū),是世界上現(xiàn)存地勢(shì)最高的原始熱帶雨林之一,蘊(yùn)藏著極其豐富的稀有放線菌資源,至今仍然未開發(fā)利用。我們對(duì)五指山原始林區(qū)不同海拔高度和不同植被生境的土壤樣品的稀有放線菌進(jìn)行了分離、初步鑒定及以香蕉枯萎鐮刀菌4號(hào)小種(Fu

2、saium oxysporum f.sp.cubense race4)為對(duì)象進(jìn)行了抑菌效果初步評(píng)價(jià),旨在發(fā)現(xiàn)稀有放線菌新屬、新種,獲得對(duì)香蕉枯萎鐮刀菌病害具良好抑菌效果的稀有放線菌菌株。初步研究結(jié)果如下:
　　 一、采用稀釋平板法,主要選取HV、葡萄糖天門冬素、甘油天門冬素和土壤浸汁四種選擇性培養(yǎng)基(每種培養(yǎng)基上均含有20mg/L的制霉菌素、20mg/L放線菌酮及50mg/L的重鉻酸鉀),結(jié)合苯酚、SDS、干熱和超聲波四種不同的

3、預(yù)處理方法,共從五指山原始林區(qū)不同海拔高度不同生境的116份土樣中分離得到702株稀有放線菌,其中以苯酚預(yù)處理后再涂布于HV瓊脂上分離得到的稀有放線菌最多。
　　 二、對(duì)不同海拔高度分離到的稀有放線菌數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,發(fā)現(xiàn)稀有放線菌的數(shù)量隨海拔高度的升高而降低;同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)不同生境樣品中分離得到的稀有放線菌的數(shù)量也是不一樣的。
　　 三、根據(jù)氣生菌絲有無(wú)、菌落的顏色、生長(zhǎng)及形態(tài)的觀察,產(chǎn)水溶性色素的情況等,將702株稀

4、有放線菌劃分為14個(gè)類群。
　　 四、從上述14個(gè)類群中挑選26株稀有放線菌進(jìn)行了形態(tài)觀察和16S rRNA基因序列分析,結(jié)果顯示此26株菌分別為小單孢菌屬,冢村菌屬,小雙孢菌屬,指孢囊菌屬,野村菌屬,游動(dòng)四孢屬,Luedemannella及Streptosporangiaceae str.,其中以小單孢菌屬為主。
　　 五、以香蕉枯萎病菌4號(hào)小種為抑制對(duì)象,對(duì)702株稀有放線菌進(jìn)行抑菌活性初步測(cè)定和篩選,發(fā)現(xiàn)菌株210

5、-1-61具有較強(qiáng)的拮抗活性,抑菌距離達(dá)8.2mm。
　　 六、對(duì)拮抗菌210-1-61進(jìn)行鑒定,通過形態(tài)特征及16S rDNA序列分析,再通過生理生化等多項(xiàng)特征與相關(guān)近緣種屬比較,我們將其鑒定為小單孢菌屬,與Micromonosporapattaloongensis JCM12833T親緣關(guān)系最近。
　　 七、對(duì)菌株119-1-07的進(jìn)行初步鑒定,發(fā)現(xiàn)其形態(tài)特征與Luedemannella,flava7-40(26)T