安徽地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的流行病學(xué)調(diào)查及地方株的特性研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type2，PCV2)引起的豬的一系列疾病的總稱，主要包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)和豬皮炎與腎病綜合征(Porcine dermatis and nephropathy syndrome，PDNS)等。由于PCV2主要侵害機(jī)體的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致免疫抑制，造成繼發(fā)感染，對(duì)養(yǎng)豬

2、業(yè)造成的直接、間接損失十分巨大，從而備受世界獸醫(yī)界的關(guān)注。為了解PCV2在安徽省的流行情況，以及PCV2安徽地方株的生物學(xué)特性，本研究在2008～2009年間對(duì)從安徽省內(nèi)各地采集來(lái)的豬血清樣本進(jìn)行ELISA檢測(cè)，分離鑒定安徽地區(qū)PCV2流行毒株，并進(jìn)行ORF2基因測(cè)序以及動(dòng)物致病性試驗(yàn)。從而為掌握安徽省豬群中PCV2的感染狀況、地方流行株的相關(guān)特性、疫苗株的篩選提供科學(xué)依據(jù)，為有效防控豬圓環(huán)病毒病奠定理論基礎(chǔ)。
　　 1．應(yīng)用酶

3、聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)采自安徽省14個(gè)市（縣）的468份血清樣品進(jìn)行PCV2抗體檢測(cè)，并運(yùn)用PCR技術(shù)同步進(jìn)行PCV2核酸檢測(cè)。安徽省PCV2抗體檢測(cè)的平均陽(yáng)性率為74.36％，且陽(yáng)性率隨豬的日齡增長(zhǎng)而升高，皖南地區(qū)的陽(yáng)性檢出率明顯高于淮北和江淮兩個(gè)地區(qū)，PCR與ELISA檢測(cè)結(jié)果的符合率為99.37％。安徽省豬群中普遍存在PCV2的感染，病毒血癥與抗體共存現(xiàn)象顯著。
　　 2．運(yùn)用PCR技術(shù)對(duì)采自肥東、定遠(yuǎn)、白湖、宣城

4、、肥西等縣市的不同豬場(chǎng)疑似PMWS發(fā)病仔豬的組織病料進(jìn)行PCV2檢測(cè)，篩選陽(yáng)性樣品經(jīng)處理后接種PK-15細(xì)胞進(jìn)行PCV2的分離增殖，根據(jù)PCR、間接免疫熒光試驗(yàn)、電鏡技術(shù)進(jìn)行PCV2分離株的鑒定。PCR檢測(cè)均擴(kuò)增出的PCV2特異性目的條帶，電鏡下可見(jiàn)直徑在17nm左右的病毒粒子，并可在胞漿內(nèi)形成大包涵體，間接免疫熒光試驗(yàn)在細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)中可見(jiàn)特異性熒光，證實(shí)獲得5株P(guān)CV2，分別命名為FD0801、DY0801、BH0801、FX090

5、1和XCh0901。
　　 3．比較5株P(guān)CV2分離株ORF2基因第1088-1718位核苷酸序列(630bp)與GenBank中國(guó)內(nèi)外27株參考株的同源性為87.3％～99.6％;5株分離毒株彼此之間的同源性介于92.1～99.6％，傳代30次ORF2基因變異較??；進(jìn)一步建立的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)顯示PCV2的ORF2基因核苷酸序列比較穩(wěn)定，其進(jìn)化不存在明顯的地域相關(guān)性，5株分離毒株可能屬于PCV2b基因亞型。分離毒株進(jìn)行小白鼠致病性試